Desenvolvimento de uma multiplex-nested-RT-PCR para a detecção simultânea de cinco RNA vírus associados a infecções congênitas.

• Processo: 17/26543-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2020
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Thelma Suely Okay
• Beneficiário: Thelma Suely Okay
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Kelly Aparecida Kanunfre
• Assunto(s): Técnicas de diagnóstico molecular Perinatologia Mortalidade perinatal
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diagnóstico Molecular | Infecções congênitas | Infecções perinatais | mortalidade perinatal | Multiplex-nested-PCR | RNA Virus | Perinatologia

Resumo

O objetivo desta proposta é desenvolver uma multiplex-nested-RT-PCR capaz de detectar de forma simultânea cinco RNA vírus associados a infecções congênitas: vírus da rubéola, enterovírus (poliovírus, echovírus, coxckasie vírus, outros enterovírus não classificados), além de três arbovírus (dengue, chikungunya e zika), por meio de amplificações do tipo multiplex-nested-RT-PCR, confirmadas pela amplificação quantitativa apenas do patógeno evidenciado no teste combinado. Os casos positivos serão sequenciados e comparados a protótipos do GenBank. Em nosso laboratório, uma multiplex-nested-PCR capaz de detectar sete patógenos que contêm DNA no genoma e associados a infecções congênitas (Toxoplasma gondii, CMV, HSV, EBV, VZV, parvovírus B19 e adenovírus) foi desenvolvida e após a análise de 357 amostras clínicas provenientes de casos suspeitos (n=161) e casos sem suspeita de infecção (n=196), totalizando 357 casos, a multiplex-nested-PCR detectou 60 casos positivos em 161 suspeitos (37,3%) contrastando com os 13 casos (8%) diagnosticados pelos exames disponíveis nos dois centros obstétricos participantes, 4,7 vezes menos casos. A presente proposta pretende aproveitar a experiência adquirida pelo grupo para desenvolver uma segunda ferramenta molecular, mais complexa, que deverá, juntamente com a primeira, possibilitar a detecção de 12 patógenos, aumentando significativamente os diagnósticos no pré-natal, propiciando tratamento em alguns casos, e seguimento mais amiúde de todas as gestações nas quais infecções foram diagnosticadas. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DOS SANTOS, EMILLY HENRIQUE; YAMAMOTO, LIDIA; DOMINGUES, WILSON; DI SANTI, SILVIA MARIA; KANUNFRE, KELLY APARECIDA; OKAY, THELMA SUELY. A new Real Time PCR with species-specific primers from Plasmodium malariae/P. brasilianum mitochondrial cytochrome b gene. Parasitology International, v. 76, JUN 2020. (18/20615-3, 17/26543-1)

RENTE FERREIRA FILHO, JULIO CESAR; ALMEIDA BRAZ, LUCIA MARIA; ALVES ANDRINO, MARCOS LUIZ; YAMAMOTOA, LIDIA; KANUNFREA, KELLY APARECIDA; OKAYA, THELMA SUELY. Mitochondrial and satellite real time-PCR for detecting T. cruzi DTU II strain in blood and organs of experimentally infected mice presenting different levels of parasite load. Experimental Parasitology, v. 200, p. 13-15, MAY 2019. (17/26543-1)

RENTE FERREIRA-FILHO, JULIO CESAR; ALMEIDA BRAZ, LUCIA MARIA; ALVES ANDRINO, MARCOS LUIZ; YAMAMOTO, LIDIA; YAMASHIRO KANASHIRO, EDITE HATSUMI; GONCALVES DA SILVA, ANA MARIA; KANUNFRE, KELLY APARECIDA; OKAY, THELMA SUELY. A sensitive and reliable quantitative immunohistochemistry technique to evaluate the percentage of Trypanosoma cruzi-infected tissue area. Parasitology International, v. 80, FEB 2021. (17/26543-1)

YAMAMOTO, LIDIA; AMORIM FILHO, ANTONIO G.; QUEIROZ, JOELMA A.; DE CARVALHO, MARIO H. B.; RODRIGUES, JONATAS C.; KANUNFRE, KELLY A.; FRANCISCO, V, ROSSANA P.; OKAY, THELMA SUELY. Performance of a Multiplex Nested Polymerase Chain Reaction in Detecting 7 Pathogens Containing DNA in Their Genomes Associated With Congenital Infections. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE, v. 144, n. 1, p. 99-106, JAN 2020. (17/26543-1)