| Processo: | 18/05823-9 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de maio de 2019 |
| Data de Término da vigência: | 30 de abril de 2022 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos |
| Pesquisador responsável: | Alexandre Paulo Yague Lopes |
| Beneficiário: | Alexandre Paulo Yague Lopes |
| Instituição Sede: | Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | São Paulo |
| Pesquisadores associados: | Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento |
| Assunto(s): | Leptospira interrogans Sistemas toxina-antitoxina Óperon VapBC Virulência Clonagem Expressão gênica |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Leptospira | toxina-antitoxina | VapBC | Sistemas Toxina-Antitoxina |
Resumo
Leptospira interrogans é um dos agentes causadores da leptospirose humana. Os operons Toxina-Antitoxina (TA) são amplamente distribuídos entre bactérias e codificam uma toxina estável e uma antitoxina instável. Sua função geral permanece controversa, mas a ação fisiológica do sistema TA é a suspensão reversível do crescimento celular sob condições de estresse. Integrantes destes sistemas têm sido relacionados à virulência de diversas bactérias durante a infecção, inclusive em L. interrogans (Komi et al., 2015). Os sistemas TA são classificados em tipos e famílias sendo que as Proteínas Associadas à Virulência B e C (VapBC) constituem a principal família TA, agrupada devido à homologia de um domínio PIN da toxina que atua como ribonuclease. O bando de dados "TA Data Base" (TADB) mostra que a L. interrogans serovar Copenhageni possui quatro loci vapBC, todos no cromossomo I. Previamente publicamos a caracterização bioquímica e funcional do primeiro membro descrito da família VapBC em leptospira que corresponde ao locus vapBC-3 (Lopes et al., 2014). Este projeto prevê a caracterização dos demais módulos VapBC com a clonagem e expressão dos operons vapBC 1, 2 e 4 em E. coli; purificação das proteínas recombinantes; caracterização da funcionalidade dos operons através da determinação da atividade tóxica e antitóxica sobre o crescimento de E. coli; reconhecimento (Western blotting) em diferentes linhagens de leptospira; avaliação de reatividade imunológica cruzada entre as toxinas e antitoxinas; teste de afinidade in vitro entre toxina e antitoxina ("ligand affinity blotting") e detecção diferencial de VapB e C (Western blotting) em leptospiras sob condições de estresse. Finalmente, este trabalho pretende elucidar se os módulos VapBC são funcionais e contribuir no estudo do seu papel na fisiologia do estresse bacteriano e levar a estudos futuros de sua função na patogenicidade da bactéria. (AU)
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