Caracterização da proteina óssea morfogenetica humana (hBMP-2) mediante ensaios físico-químicos, imunológicos e biológicos.

• Processo: 20/02193-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Paolo Bartolini
• Beneficiário: Paolo Bartolini
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bmp-2 | CHO cell-derived | C2C12 bioassay | Efficient osteoinductor | Escherichia coli-derived | Síntese e caracterização de proteínas recombinantes

Resumo

Preparações comerciais disponíveis de metionil- hBMP-2 e de BMP-2 derivada de células CHO, que pertence a superfamilia de fatores de crescimento transformantes-² (TGF-²), foram usadas para uma sua completa caracterização. Esta proteína é um osseoindutor extremamente eficiente e possui um papel importante durante a regeneração óssea e o desenvolvimento embrionário. Sua caracterização foi realizada mediante SDS-PAGE e Western blotting, seguidas por HPLC de exclusão molecular (HPSEC) e de fase reversa (RP-HPLC) e MALDI-TOF-MS. O clássico bioensaio in vitro baseado na indução de fosfatase alcalina em células C2C12 confirmou que a atividade biológica da hBMP-2 está particularmente relacionada com a forma dimérica, sendo aproximadamente 4 vezes maior para a forma glicosilada derivada de células CHO, em comparação com aquela derivada de E. coli. A forma derivada de E. coli mostrou, mediante MALDI-TOF-MS, uma grande presença do dimero bioativo. Uma distribuição de massa molecular (MM) mais complexa foi encontrada para o produto derivado de CHO, cuja exata MM nunca foi relatada devido a sua variável glicosilação. Um método baseado em RP-HPLC foi também padronizado, permitindo uma determinação quantitativa e qualitativa diretamente no meio de cultura. Considerando que a hBMP-2 é altamente instável, presentando também um alto valor agregado, acreditamos que os presentes dados abrem o caminho para uma caracterização necessária deste importante fator, quando será sintetizado mediante técnicas de DNA recombinante em diferentes hospedeiros. (AU)