LPMO AfAA9_B e celobiohidrolase AfCel6A de A. fumigatus aumentam a atividade de sacarificação enzimática do coquetel de cellulase

• Processo: 21/00087-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2021
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Taisa Magnani Dinamarco
• Beneficiário: Taisa Magnani Dinamarco
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Bioetanol Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aa9 Lpmo | bioethanol | GH6 cellobiohydrolase | lignocellulose hydrolysis | Biologia Molecular

Resumo

A celulose é o polissacarídeo mais abundante na biomassa lignocelulósica, e está interligada com a lignina e a hemicelulose. O bioetanol pode ser produzido a partir da biomassa. Devido à dificuldade de quebra dessa biomassa, as enzimas ativas da celulose secretadas por fungos filamentosos desempenham um papel importante na degradação da biomassa lignocelulósica recalcitrante. Dessa forma, caracterizamos uma celobiohidrolase (AfCel6A) e uma monooxigenase lítica de polissacarídeo LPMO (AfAA9_B) de Aspergillus fumigatus após serem expressas em Pichia pastoris e purificadas. Os parâmetros bioquímicos sugeriram que as enzimas eram estáveis; a temperatura ideal era de ~ 60 ° C. A caracterização posterior revelou altos números de rotatividade (kcat de 147,9 s 1 e 0,64 s 1, respectivamente). Surpreendentemente, quando combinados, AfCel6A e AfAA9_B não agiram sinergicamente. A associação AfCel6A e AfAA9_B inibiu a atividade de AfCel6A, um resultado que precisa ser mais investigado. No entanto, a adição de AfCel6A ou AfAA9_B aumentou a atividade de sacarificação enzimática de um coquetel de celulase e a atividade da celulase Af-EGL7. A suplementação do coquetel enzimático com AfCel6A ou AfAA9_B aumentou o rendimento de açúcares fermentáveis de substratos complexos, especialmente bagaço de cana-de-açúcar explodido, em até 95%. O sinergismo entre o coquetel de celulase e AfAA9_B foi específico para enzimas e substratos, o que sugere um coquetel enzimático específico para cada biomassa em até 95%. O sinergismo entre o coquetel de celulase e AfAA9_B foi específico para enzimas e substratos, o que sugere um coquetel enzimático específico para cada biomassa (AU)