Desenvolvimento de um teste imunocromatográfico para detecção de carbapenemases em enterobactérias

• Processo: 21/01158-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2021
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2024
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Cristina Gales
• Beneficiário: Ana Cristina Gales
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Marcelo Ferreira Marcondes Machado ; Roxane Maria Fontes Piazza
• Assunto(s): Técnicas e procedimentos diagnósticos Testes imediatos Imunocromatografia Enterobacteriaceae Enterobacteriáceas resistentes a carbapenêmicos Carbapenemases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Imunocromatográfico | Kpc-2 | Spm-1 | teste rápido | Diagnóstico

Resumo

A aprovação de novos antimicrobianos para o tratamento de infecções causadas por bactérias gram-negativas produtoras de carbapenemases de classes A, C e D tem resultado a necessidade de testes laboratoriais que sejam capazes de diferenciar as distintas classes de ²-lactamases. O teste imunocromatográfico ou de fluxo lateral tem como princípio a ligação antígeno-anticorpo com um marcador de cor, normalmente um coloide, para a diferenciação de diversas substâncias, e sua utilização tem apresentado bons resultados em estudos descritos na literatura. Porém, os testes imunocromatográficos desenvolvidos para a detecção de carbapenemases se baseiam na epidemiologia de países desenvolvidos, desta forma, não se adequam completamente à realidade brasileira. Sendo assim, nosso objetivo é o desenvolvimento, padronização e validação de um teste rápido na plataforma para testes imunocromatográficos com base na epidemiologia de resistência aos antimicrobianos presentes no território nacional. Para alcançar estes objetivos, selecionaremos 2 enzimas carbapenemases de interesse clínico presentes na epidemiologia brasileira, sendo elas: KPC-2 e SPM-1. Os genes destas enzimas serão confirmados e, posteriormente, clonados em um vetor de expressão. Logo após as enzimas serão expressas e purificadas. Serão produzidos anticorpos policlonais a partir da imunização de coelhos Nova Zelândia e anticorpos monoclonais a partir de camundongos da linhagem Balb/c. Os camundongos serão sacrificados para a retirada de linfonodos poplíteos e estes serão fusionados para a obtenção de hibridomas. Esses serão clonados e classificados segundo os anticorpos produzidos. Os anticorpos irão passar por processos de purificação em colunas de afinidade, e conjugado em partículas de ouro coloidal. Para a confecção da plataforma imunocromatográfica utilizaremos papéis de vidro, celulose, fibra, nitrocelulose HiFlow e a absorbing pad. Estes papéis serão tratados e sobrepostos em uma base de plástico. A padronização do teste se dará pela avaliação de diferentes parâmetros, como o volume necessário de anticorpos para apresentar positividade, a região de bloqueio e o conjugado ideal. Para a validação será utilizada diferentes cepas de enterobactérias produtoras e não produtoras de carbapenemases e a avaliação com teste-cego de amostras clínicas. Com os resultados obtidos apresentaremos um novo teste rápido laboratorial para a detecção e diferenciação de carbapenemases, baseado na epidemiologia mundial das carbapenemases produzidas por enterobactérias. Esperamos que este teste seja barato, de fácil realização e que possa ser disponibilizado para os laboratórios clínicos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

VALENCIO, ANDRE; DA SILVA, MIRIAM APARECIDA; SANTOS, FERNANDA FERNANDES; POLATTO, JULIANA MOUTINHO; MACHADO, MARCELO MARCONDES FERREIRA; PIAZZA, ROXANE MARIA FONTES; GALES, ANA CRISTINA. Capture ELISA for KPC Detection in Gram-Negative Bacilli: Development and Standardisation. MICROORGANISMS, v. 11, n. 4, p. 14-pg., 2023-04-01. (21/01158-3)