Aplicação de marcadores moleculares para monitoramento da qualidade de linhagens celulares humanas e não humanas

• Processo: 22/07783-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Érika Machado de Salles
• Beneficiário: Érika Machado de Salles
• Empresa: BS Análises Laboratoriais Ltda
• CNAE: Pesquisa e desenvolvimento experimental em ciências físicas e naturais ; Atividades profissionais, científicas e técnicas não especificadas anteriormente
• Município: São Paulo
• Pesquisadores principais: Eduardo Leal Rodrigues
• Pesquisadores associados: Paula Carolina de Souza
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/01259-0 - Validação de ensaios de amplificação por PCR Multiplex Fluorescente para a autenticação de linhagens celulares não humanas e detecção de mycoplasma, BP.TT; 23/01255-4 - Aplicação de marcadores moleculares para monitoramento da qualidade de linhagens celulares humanas e não humanas, BP.PIPE
• Assunto(s): Eletroforese capilar Linhagem celular Marcador molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Análise de fragmentos | autenticação de linhagens celulares | Eletroforese de capilar | Identidade Genética | Análise de fragmentos (STRs)

Resumo

Culturas celulares primárias, linhagens celulares contínuas (imortalizadas) e tecidos são de extrema importância para a indústria farmacêutica e pesquisa biomédica, por serem modelos de estudo de sistemas fisiológicos mais complexos. O controle de qualidade de linhagens celulares é essencial para garantir a reprodutibilidade. Embora as linhagens celulares sejam usadas por décadas, erros de identificação, tais como as trocas de linhagens e a contaminação cruzada (intra- e interespecífica), permanecem sendo um problema. Desta forma, as ferramentas para autenticação de linhagens celulares são críticas para o controle de qualidade em experimentos biológicos baseados em células. Os métodos atuais para autenticar linhagens de células humanas utilizam-se marcadores de repetição curta em tandem (STRs), tendo como base os procedimentos utilizados com sucesso na comunidade forense para identificação humana. Porém, não há métodos, baseado em STR para autenticar linhagens de células não humanas até o momento. Portanto, nosso projeto visa validar marcadores genéticos do tipo STR para autenticação de linhagens de células murinas e de células isoladas do rim do macaco verde africano (Chlorocebus aethiop sabaeus), linhagem está designada como Vero e amplamente difundida em pesquisas que cultivam vírus, como para o isolamento do SARS-CoV-2, desenvolvimento de vacinas e ensaios de citotoxicidade. Além disso, nosso objetivo é desenvolver um serviço de autenticação de linhagens celulares em conjunto com a análise de contaminantes de cultura constantemente testados, como a presença de micoplasma e/ou presença de material genético murino em linhagens celulares humanas. De forma inovadora no Brasil, todo o nosso serviço será validado utilizando amostras em papel filtro e transporte à temperatura ambiente. Desta forma, o pesquisador de qualquer lugar do Brasil terá a oportunidade de realizar o acompanhamento de suas linhagens para o controle de qualidade de seus experimentos ou confirmar a identidade de linhagens recebidas em seu laboratório. Nosso grupo de pesquisa busca salientar, em termos educacionais, a importância do monitoramento das linhagens células, uma vez que tais ferramentas consistem de unidades com dinamismo populacional, isto é, com o avanço das passagens tende a adquirir mudanças (mutações) que podem ser neutras ou que venham a impactar na uniformidade do sistema, consequente, gerando impactos na reprodutibilidade dos dados, o que indiretamente gera mais custos financeiros e de esforços com repetições. (AU)