Comparação da modulação off-target da nuclease Zinc-finger protein 36 (ZFP36) pelos doadores de sulfeto de hidrogênio citosólico (ATB-346) e mitocondrial (AP-39) sobre o fenótipo endotelial pró-trombótico e pró-inflamatório

• Processo: 24/02250-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2026
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Cardiorenal
• Acordo de Cooperação: CNPq
• Pesquisador responsável: Stephen Fernandes de Paula Rodrigues
• Beneficiário: Stephen Fernandes de Paula Rodrigues
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/05115-2 - Efeito do tratamento com AP39 ou ATB346, doadores de H2S mitocondrial e híbrido, respectivamente, em modelo experimental de trombose: Ensaios in vivo em vasos sanguíneos cerebrais e in vitro, AP.R
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/12229-7 - Comparação da modulação off-target da nuclease Zinc-finger protein 36 (ZFP36) pelos doadores de sulfeto de hidrogênio citosólico (ATB-346) e mitocondrial (AP-39) sobre o fenótipo endotelial pró-trombótico e pró-inflamatório, BP.JD
• Assunto(s): Biologia celular Coagulação sanguínea Disfunção endotelial Sulfeto de hidrogênio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biologia celular | coagulação sanguinea | disfunçao endotelial | Sulfeto de Hidrogenio | Farmacologia vascular

Resumo

O endotélio tem um papel fisiológico na manutenção da hemostasia com a liberação de fatores anti-agregantes plaquetários, fibrinolíticos e antitrombóticos. No entanto, em situações patológicas o fenótipo endotelial pode converter-se num estado pró-trombótico com consequências locais e sistêmicas se não controlado. O uso de doadores de sulfeto de hidrogênio (H2S), um importante mediador gasoso endógeno, demonstraram potencial antitrombótico e regulatório por inibir a ativação de plaquetas. Novos fármacos recém-sintetizados atuam como doadores rápidos de H2S via mitocondrial (AP-39) ou citosólica (ATB-346), esses medicamentos possuem efeitos anti-inflamatórios com ausência de reações adversas gastrintestinais. No entanto, os mecanismos de ação e suas concentrações terapêutica e patológica em determinados tipos celulares permanecem indefinidos. Um novo alvo potencial das ações mediadas pelo H2S, é o aumento da expressão de proteinas Zinc-finger, importantes reguladoras da transcrição gênica. A ZFP36 tem importante função anti-inflamatória, suprimindo a transcrição e consequente expressão de NF-ºB e da citocina IL-6, importantes componentes da resposta inflamatória. Sabendo que, a ZFP36 é rica em cisteína e sensível ao sistema redox, neste projeto vamos avaliar se o mecanismo de ação e potencial efeito anti-trombótico/antiplaquetário e anti-inflamatório estabelecidos na literatura de dois doadores de H2S, ATB-346 e AP-39, são dependentes da expressão e ação da proteína ZFP36. Para testar nossa hipótese, objetivos específicos são propostos: 1) Determinar se o tratamento com doadores de H2S é capaz de modular a transcrição e expressão da ZFP36 em células endoteliais. Células endoteliais tratadas serão extraídas para quantificação da expressão gênica e proteica. 2) Avaliar se a proteína ZFP36 é necessária para o efeito anti-inflamatório exercido pelos doadores de H2S, ATB-346 e AP-39. Células endoteliais tratadas com RNAs de interferência (siRNAs) para ZFP36 na presença ou ausência dos fármacos ATB346 e AP39 serão avaliadas em ensaios funcionais in vitro quanto ao seu fenótipo endotelial pró-trombótico por meio da atividade do inibidor da via do fator tecidual (TFPI), migração e permeabilidade da célula endotelial, produção de citocina pró-inflamatória por ELISA e avaliação da expressão de proteínas relacionadas ao processo pró-inflamatório e de coagulação. 3) E para avaliar o potencial ex vivo anti-trombótico/anti-plaquetário exercido pelos doadores de H2S ATB346 e AP39, iremos realizar o ensaio de adesão de plaquetas em células endoteliais tratadas com RNAs de interferência (siRNAs) para proteína ZPF36. Com estes resultados pretendemos elucidar se o eixo de sinalização H2S/persulfidação medeia a resposta inflamatória e antitrombótica por via dependente da sinalização da proteína ZPF36 e consequente manutenção do fenótipo anti-inflamatório e anti-agregante plaquetário da célula endotelial (AU)