EMU: Upgrade da Facility de Metabolismo e Citometria do Instituto de Biologia da Unicamp.

• Processo: 23/17089-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Infraestrutura - Pequeno Médio Porte
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2027
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Pedro Manoel Mendes de Moraes Vieira
• Beneficiário: Pedro Manoel Mendes de Moraes Vieira
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Carlos Henrique Grossi Sponton ; Fabio Trindade Maranhão Costa
• Assunto(s): Metabolismo Imunometabolismo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Imunologia | metabolismo | Imunometabolismo

Resumo

O presente projeto tem como objetivo a aquisição dos equipamentos Agilent Seahorse XF Imaging e QX200 Droplet Digital PCR System para aprimorar e fortalecer as capacidades da Facility multiusuária de metabolismo e citometria de fluxo do Instituto de Biologia da Unicamp. Hoje a Facility, conta, na área de metabolismo, com dois equipamentos adquiridos com verba FAPESP para estudos metabólicos em tempo real (Seahorse Analyzer XFe24 e o Seahorse Analyzer XFe96). O Agilent Seahorse XF Imaging é um instrumento multifuncional que integra microscopia de campo claro, fluorescência e leitura de placas de microtitulação para integração e normalização de dados obtidos no Seahorse Analyzer. A normalização de dados é essencial para a validade de qualquer experimento, especialmente quando há variações na quantidade de amostras. Na análise metabólica celular em tempo real usando a tecnologia Agilent Seahorse XF, a quantidade de células por poço é a forma mais aceita como valor de referência para a normalização de dados. Isso pode ser determinado tanto pela contagem direta de células quanto indiretamente pela medição de biomoléculas como proteínas totais ou DNA genômico. O sistema Agilent Seahorse XF de Imageamento de Normalização integra a tecnologia XF com um leitor Agilent Seahorse XF Imaging Multi-Mode. Nessa configuração, o Agilent Seahorse XF Imaging é controlado pelo novo software Agilent Seahorse XF Imaging and Cell Counting, oferecendo uma solução simplificada, automatizada e validada para contagem de células com base em imagens microscópicas. Isso permite: i) a aplicação in situ de um composto corante nuclear permeável à membrana celular (por exemplo, Hoechst 33342, mitogreen), ii) imagens automatizadas e contagem de células otimizadas para ensaios XF, e iii) sincronização de imagens e contagem de células nos arquivos de resultados XF no software Wave. Isso permite um método eficiente e confiável de normalização, proporcionando a todos os usuários do XF Analyzer um fluxo de trabalho contínuo, rápido, confiável e atualizado com as exigências atuais em estudos metabólicos. A PCR Digital é uma tecnologia inovadora que fornece detecção ultrassensível de ácidos nucleicos e quantificação absoluta. É altamente eficaz para alvos de baixa abundância, como variantes alélicas ou estruturais, que estão abaixo do nível de detecção de outras plataformas. Estratégias de PCR digital apresentam grande potencial e serão aplicadas com sucesso para: (i) medir biomarcadores em diversos cenários clínicos; (ii) ensaios de genotipagem e modulações metabólicas de medicamentos para detecção de polimorfismos em genes que codificam várias enzimas do metabolismo de medicamentos (DMEs) e proteínas de transporte associadas; (iii) quantificação e qualificação precisas de bibliotecas NGS sem o uso de uma curva padrão; entre outras aplicações. (AU)