Estudo do padrao de expressao alelo-especifico dos genes igf-ii e h-19 em tumores humanos.

• Processo: 95/07141-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1996
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 1998
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Silvia Regina Rogatto
• Beneficiário: Silvia Regina Rogatto
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Polimorfismo genético Imprinting genômico Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao Genica | H-19 | Igf-Ii | Imprinting Genomico | Polimorfismos | Tumores Solidos

Resumo

O "imprinting" genômico é um tipo de herança na qual os genes são expressos seletivamente e resulta na não equivalência de expressão dos alelos dependendo da origem parental. Os genes IGF-II e H19 (mapeados em 11p15.5) apresentam um padrão de "imprinting" recíproco com a expressão do alelo paterno do IGF-II e materno do H19. O IGF-II possui um efeito mitogênico potente em células epiteliais derivadas de cânceres de mama e a expressão aumentada deste fator tem sido observada em sarcomas (que são tumores de origem mesenquimal) e em meningeomas. Em tumor de Wilms e em rabdomiosarcomas o padrão de expressão monoalélica deste gene encontra-se alterado. O gene H19 codifica um RNA encontrado de forma abundante durante o desenvolvimento embrionário e é acumulado em grandes quantidades nos tecidos de origem endodérmica e mesodérmica. O gene H19 não produz uma molécula de mRNA típica pois esta não é traduzida em proteína. As análises de sua distribuição subcelular indicaram que o produto final deste gene pode ser a própria molécula de RNA cuja função permanece desconhecida. Recentemente, tem-se proposto que este seria um gene supressor tumoral. O principal efeito da perda do "imprinting" na carcinogênese seria um aumento da expressão do gene que sofreu esta perda, ou seja, a expressão passaria de uma cópia para duas cópias ativas. Desta forma, a perda do "imprinting" do gene IGF-II poderia ser um passo importante por levar a altos níveis de IGF-II. Um mecanismo alternativo seria a perda da função de um gene supressor tumoral. O gene H19 poderia levar ao desenvolvimento tumoral se o alelo materno fosse perdido. Adicionalmente, a perda do "imprinting" do gene IGF-II poderia alterar a expressão do H19; desta forma, a perda de heterozigosidade e a perda do "imprinting" do IGF-II poderia levar ao mesmo resultado: um decréscimo na expressão do H19. Considerando - se que muito pouco é conhecido sobre os mecanismos que atuam na regulação da expressão destes genes em tecidos humanos propomos este projeto com o objetivo de estudar o significado, a função e as possíveis interações dos genes IGF-II e H19 em tumores primários humanos. A especificidade da expressão destes genes será determinada utilizando como marcadores polimorfismos já descritos (RFLP ou repetições de dinucleotídeos). Inicialmente, amostras de DNA tumoral e normal serão amplificadas por PCR, digeridas com enzimas de restrição e os fragmentos separados por eletroforese. Se a heterozigosidade for determinada e mantida pelas células tumorais, uma análise similar será realizada com o cDNA obtido a partir do RNA tumoral por transcrição reversa e subseqüente amplificação por PCR (RT-PCR). (AU)