Estudos in vivo e in vitro da foliculogênese inicial em bovinos

• Processo: 07/04507-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Wilter Ricardo Russiano Vicente
• Beneficiário: Wilter Ricardo Russiano Vicente
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Assunto(s): Fertilização in vitro animal Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovinos | Camundongos | cultivo in vitro | Folículos Pré-Antrais | ovários | Xeno-transplante | Biotecnologia da reprodução

Resumo

Objetiva-se avaliar diferentes técnicas de cultivo in vitro e in vivo, quanto ao desenvolvimento folicular pré-antral em bovinos. Para tanto, o delineamento experimental será composto por cultivo in vitro (Fase 1), baseando-se em protocolo bem sucedido de cultivo de FOPA e testando diferentes fontes de macromoléculas; cultivo in vivo de FOPA (Fase 2), que será executado por xeno-enxerto com e sem estímulo hormonal das receptoras e, por último (Fase 3), comparar-se-ão os melhores resultados obtidos a partir dos cultivos in vitro e in vivo a partir dos mesmos ovários. Para a execução dos experimentos, 40 ovários de fetos bovinos, oriundos de matadouro, serão coletados e processados no laboratório até a obtenção de fragmentos corticais medindo 1mm3, com os FOPA classificados quanto ao tamanho e morfologia, sendo distribuídos igualmente entre os tratamentos. Para o cultivo in vitro, os fragmentos serão submetidos a uma atmosfera controlada de 5%CO2 em ar, a 39°C e nutridos com dMEM (300 mOsm/L, pH 7,2) suplementado com antibióticos, antimicótico, insulina, transferrina, selênio, piruvato de sódio, glutamina, hipoxantina, dAMPc, bFSH e IGF-I. A depender do tratamento, serão adicionados 1% de BSA, 10% de soro fetal bovino ou 1% de PVA. Para cultivo in vivo, fragmentos ovarianos serão introduzidos sob a cápsula renal de camundongos fêmeas, imunossuprimidas, pela técnica de xeno-enxertia; as quais serão subdivididas em três grupos (controle, estimuladas com FSH ou com eCG) e avaliadas posteriormente. Os folículos obtidos após cultivo in vitro e in vivo serão avaliados quanto à viabilidade pelo crescimento do dia zero ao final do cultivo e, quanto à integridade por microscopia de inversão ao longo dos cultivos in vitro, histologia clássica e microscopia eletrônica em todos os cultivos. Folículos que venham a se desenvolver e medir entre 2 e 6 mm de diâmetro serão puncionados e seus oócitos submetidos às etapas de produção in vitro. Para a comparação entre a proporção de folículos saudáveis e atrésicos será utilizado o teste de qui-quadrado (p<0,05). Para os crescimentos in vitro e in vivo serão feitas análise de regressão dentro dos tratamentos e, entre tratamentos, por análise de variância seguida do teste de Tukey (p<0,05). (AU)