Caracterização genética e fenotípica de camundongos mutantes obtidos por Ethylnitrosourea (ENU)

• Processo: 07/06835-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Silvia Maria Gomes Massironi
• Beneficiário: Silvia Maria Gomes Massironi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 09/00067-2 - Caracterização genética e fenotípica de camundongos mutantes obtidos por Ethylnitrosourea (ENU), BP.TT
• Assunto(s): Camundongos mutantes Fenótipo Mapeamento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Camundongos mutantes | Enu | fenótipo | Mapeamento | Mutagênese | mutagênese em camundongos

Resumo

Das várias estratégias existentes que possibilitam o estudo da função de genes de eucariotos, duas formas buscam seu conhecimento através da análise de sua disfunção, ou seja, através da produção de mutantes. A primeira, a qual pode ser chamada de mutagênese dirigida, por manipular genes já conhecidos, utiliza-se das técnicas de engenharia genética (knock-out, sistema Cre-Lox, etc). A segunda recorre a mutações que aparecem espontaneamente ou que são produzidas por mutagênese química que apresenta a vantagem de não precisar de um conhecimento anterior da estrutura do gene. Esta é também bem mais simples e menos onerosa que a primeira, possuindo a grande vantagem de produzir uma larga gama de mutações (ganho e perda de funções) enquanto a primeira limita-se, até o momento, à produção de alelos nulos de um determinado gene. O desenvolvimento de projetos que envolvem a indução de mutantes de camundongos tem contribuído para diminuir a falta de modelos para o estudo de doenças humanas estando intimamente relacionado com os projetos de pós sequenciamento do genoma de camundongos. É de grande importância que mutações dominantes e recessivas sejam produzidas, tendo a mutagênese química papel fundamental nesse processo.O projeto apresentado dá continuidade ao projeto de indução de mutantes em camundongos utilizando-se o agente mutagênico químico ethylnitrosourea (ENU), no qual foram obtidos 11 mutantes e iniciou-se o estudo genético dos genes responsáveis pelas mutações induzidas. Até o presente, foram localizados os genes responsáveis por uma mutação – mergulhador (mlh/mlh); a região candidata de quatro mutações – careca (carc/carc), sacudidor de cabeça (Sac/+), rodador (roda/roda) e equilíbrio (equl/equl) e o cromossomo onde estão localizadas as mutações cruza-pernas (cruz/cruz) e fraqueza (frqz/frqz). Dando seqüência ao trabalho, será iniciado neste projeto, o mapeamento genético das mutações obtidas nas quais os fenótipos observados sugerem alterações que podem ter importância no estudo de doenças humanas – anêmico (Anem/+), bate-palmas (bapa/bapa) e nervoso (nerv/nerv), além da finalização dos mapeamentos das mutações anteriormente citadas. Os nomes dados aos mutantes referem-se ao principal aspecto fenotípico observado, quando da sua seleção.Depois da caracterização fenotípica inicial, e da determinação do modo de herança, o interesse maior é chegar à causa do fenótipo, isto é, localizar o gene mutante através do mapeamento genético. O mapeamento genético, ou análise de ligação, consta da construção de mapas a partir de dados obtidos pela análise de marcadores herdados em cruzamentos controlados. A produção de híbridos a partir de duas linhagens e o subseqüente cruzamento destes híbridos entre si (caracterizando o intercruzamento) ou com seus pais (caracterizando o retrocruzamento) permite a obtenção de prole que é genotipada para marcadores polimórficos codominantes. O nível de resolução do mapeamento depende tanto da disponibilidade e quantidade destes marcadores na região a ser mapeada quanto do número de indivíduos da amostra. Delimitada a região cromossômica que abriga o locus mutante, o próximo passo é a procura por genes candidatos presentes nela. Essa busca pode ser feita com base em bancos de dados disponíveis na Internet, como o Ensembl Genome Browse (www.ensembl.org) e o Mouse Genome Informatics – MGI (www.informatics.jax.org). Estes programas apresentam informações sobre o genoma completo do camundongo, como a localização de todos os genes e marcadores conhecidos. As informações sobre a função de determinado gene, aliados ao mapeamento genético e a análise fenotípica dos animais permite classificá-lo ou excluí-lo como candidato à mutação. O seqüenciamento e os estudos de expressão gênica vêm para confirmar a hipótese do gene candidato e concluir, portanto, o estudo da função gênica (AU)