Desenvolvimento de um adsorvente seletivo para processo de purificação de DNA plasmídico para aplicação em estudos de terapia gênica e vacinação com DNA

• Processo: 07/58430-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2011
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Everson Alves Miranda
• Beneficiário: Everson Alves Miranda
• Instituição Sede: Faculdade de Engenharia Química (FEQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Terapia genética Vetores genéticos Cromatografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromatografia | Dna Plasmidico | Membrana Adsorvente | Processo | Purificacao | Terapia Genica

Resumo

A terapia gênica tem emergido como uma técnica de grande potencial para o tratamento e prevenção de doenças genéticas ou adquiridas. O avanço no número de estudos na área tem consequentemente aumentado a demanda por preparações de vetores plasmídicos (pDNA), geralmente obtidas utilizando-se longos protocolos de laboratório ou kits de purificação comerciais. Estes últimos possuem a vantagem da simplicidade e rapidez, mas possuem alto custo e não necessariamente atendem as exigentes recomendações das agências reguladoras (EMEA, FDA) para ensaios pré-clínicos. Este trabalho tem como foco estudar a interação de plasmídeos com diferentes ligantes visando ao desenvolvimento de um adsorvente seletivo para a recuperação e purificação de pDNA proveniente do lisado celular de E. coli visando a aplicação em ensaios de terapia gênica e vacinação com DNA (cultura de células de mamífero ou modelos animais). O adsorventente será baseado em membrana funcionalizada através da introdução de ligantes de natureza hidrofóbica e tiofílica. A seletividade dos adsorventes obtidos será determinada através de estudos de adsorção e do monitoramento das impurezas remanescentes (gDNA, RNA, ETs e proteínas) nas frações de interesse. Finalmente, as eficiências de transfecção de células de mamífero em cultura, utilizando-se pDNAs provenientes de purificação com o adsorvente desenvolvido neste trabalho e através de diferentes kits comerciais, serão comparadas. Além de contribuir com novos conhecimentos sobre a adsorção de pDNA em membranas funcionalizadas, espera-se ainda o desenvolvimento de um novo sistema de purificação de pDNA em pequena escala, com potencial para aplicação em processos de maior escala. (AU)