Otimizacao de vetores para expressar toxinas de serpentes em celulas de mamifero.

• Processo: 07/59684-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Geraldo Santana Magalhães
• Beneficiário: Geraldo Santana Magalhães
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Vetores Processamento de proteína pós-traducional Toxinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas De Mamifero | Expressao De Proteinas | Modificacao Pos-Traducional | Toxinas | Vetor

Resumo

Atualmente muitas toxinas de venenos de serpentes estão sendo estudadas com o intuito de encontrar novas moléculas com potencial de uso farmacológico. Entretanto, muitas toxinas são difíceis de se obter e geralmente as quantidades são muito pequenas. Para resolver este problema, muitos genes de toxinas estão sendo isolados, e expressos em organismos heterólogos. Este procedimento não só garante uma quantidade grande de proteína, mas também permite a manipulação da seqüência de DNA da toxina. Atualmente, o sistema mais empregado para expressar toxinas de serpentes tem sido o bacteriano. Contudo, muitas toxinas necessitam de muitas modificações pós-traducionais (pontes dissulfeto, glicosilação, fosforilação, etc..) e quando expressas neste sistema acabam não apresentando atividade ou são obtidas na forma insolúvel. As células de mamífero por outro lado, possuem um sistema altamente especializado de modificações pós-traducionais, e por isto estão sendo cada vez mais exploradas para produzir diversas proteínas complexas. Entretanto, apesar do grande potencial dessas células, este sistema é subexplorado na expressão de toxinas de animais peçonhentos. Assim, devido às diversas dificuldades encontradas na expressão de toxinas, principalmente aquelas com grande quantidade de pontes de sulfeto, as células de mamífero representam uma ferramenta de extrema importância e com grande potencial a ser explorado. Todavia, para que este sistema seja mais eficiente, alguns problemas necessitam ser resolvidos, como a exportação da proteína recombinante para o meio de cultura, detecção dos clones que expressam a proteína, bem como a quantidade baixa de expressão. Dessa forma, neste projeto pretendemos otimizar dois vetores de expressão que permitam resolver estas dificuldades de forma a tornar este sistema viável e atraente para expressar toxinas complexas que necessitam de modificações pós-traducionais. (AU)