Isolamento e caracterização do gene p30 de formas amastigotas de Leishmania (L. ) amazonensis: estudo do papel do antígeno recombinante na indução de respostas linfoproliferativas em modelo murino

• Processo: 00/06568-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2002
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Clara Lúcia Barbiéri Mestriner
• Beneficiário: Clara Lúcia Barbiéri Mestriner
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Genes Clonagem
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigeno | Leishmania | Leishmania (L.) Amazonesis | P30

Resumo

As tentativas de clonagem do gene que codifica um antígeno de 30kDa de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis (p30), parcialmente protetor contra a infecção homóloga em camundongos BALB/c e que apresenta atividade de cisteína proteinase, levaram ao isolamento de um clone de cisteína proteinase de 1,08kb. Os dados obtidos até o momento não nos permitem concluir se esse clone representa o gene p30. Visando ao isolamento do gene p30 e à sua expressão em vetor, pretende-se realizar: a)clonagem dirigida do gene de 1.08kb de amastigotas de L. (L.) amazonensis em vetor de expressão pGEX 3XT; b) análise da seqüência dos clones recombinantes; c) análise da proteína recombinante expressa em pGEX 3TX; d) isolamento do gene p30 a partir de uma genoteca de cDNA de L. (L.) amazonensis construída em lambda gt11 por seleção imunológica; e) clonagem do gene p30, seqüenciamento e expressão da proteína recomebinante: f) utilização da proteína recombinante em testes de linfoproliferação in vitro e imunização in vivo, comparando-se o grau de proteção conferido por esse antígeno com o da p30 nativa (AU)