Efeito de sais fluoretados na viabilidade de fibroblastos e pré-osteoblastos

• Processo: 10/14984-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2013
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Ana Carolina Magalhães
• Beneficiário: Ana Carolina Magalhães
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Rodrigo Cardoso de Oliveira
• Assunto(s): Bioquímica Fibroblastos Sobrevivência celular Flúor Osteoblastos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: fibroblastos | Fluor | osteoblastos | viabilidade celular | Bioquímica

Resumo

O flúor (F), na forma de fluoreto de sódio (NaF), é um elemento presente no cotidiano de quase a totalidade da população brasileira, sendo usado na água de abastecimento (Brasil), em produtos para uso caseiro e profissional visando a prevenção da cárie dentária (diversos países) e também na terapia da osteoporose (comumente na Europa). Assim sendo, é importante o entendimento do efeito do flúor tanto na prevenção das lesões dentárias quanto no reparo ósseo. Para o uso tópico na cavidade bucal, sais fluoretados cuja eficácia seja maior que o NaF deverão ser testados quanto à citotoxicidade de fibroblastos anteriormente a estudos clínicos, pensando em possíveis efeitos colaterais à mucosa bucal. Da mesma forma, diferentes agentes fluoretados deverão ser testados quanto à viabilidade de células pré-osteoblasticas, antes do uso terapêutico in vivo no tratamento da osteoporose, condição comumente encontrada na população mais idosa. Portanto, este trabalho será dividido em duas fases, sendo cada uma executada por um aluno de Iniciação científica. A 1ª etapa testará o efeito do TiF4 adicionado ao meio de cultura, em diferentes concentrações e pH, na viabilidade e morfologia de fibroblastos NIH3T3 em comparação ao NaF e ao meio de cultura sem agente fluoretado. Para tal, fibroblastos da linhagem NIH3T3 serão cultivados em meio DMEM. As células serão mantidas no meio de cultura durante 48h, a 37ºC e à atmosfera de CO2 5%. Na seqüência, as células serão divididas em 9 grupos de acordo com as seguintes condições do meio de cultura: a) controle: meio de cultura (pH 8,5); b) meio de cultura com NaF (2,45% F, pH 4,5); c) meio de cultura com NaF tamponado (2,45% F, pH 8,5); d) meio de cultura com NaF tamponado (1,225% F, pH 8,5); e) meio de cultura com NaF tamponado (0,6125% F, pH 8,5); f) meio de cultura com TiF4 (2,45% F, pH 1,2); g) meio de cultura com TiF4 tamponado (2,45% F, pH 4,5); h) meio de cultura com TiF4 tamponado (1,225% F, pH 4,5); e i) meio de cultura com TiF4 tamponado (0,6125% F, pH 4,5). Os ensaios de citotoxicidade levarão em conta a viabilidade celular que será analisada pela redução do MTT e a captação do vermelho neutro após 3, 6, 12, 24 e 48h. A avaliação da morfologia será realizada pela microscopia de luz, devendo ser descrita a morfologia geral das células, integridade da membrana, descolamento e lise celular. Na 2ª etapa, será avaliado, comparativamente, o comportamento de pré-osteoblastos tratados com diferentes doses e compostos de flúor. Células da linhagem MC3T3 (ATCC) serão incubadas com diferentes concentrações (5 µM, 10 µM, 100 µM e 1 mM) de fluoreto de sódio (NaF) e fluoreto de alumínio (AlF2), a 37oC, nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas. As células serão avaliadas quanto à viabilidade celular (redução do MTT e captação do Vermelho Neutro) e atividades de enzimas (fosfatase ácida total, fosfatase lisossomal e proteína tirosina fosfatase). Os dados serão tabulados e submetidos à análise estatística (p<0,05). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

KELLEN CRISTINA DA SILVA GASQUE; LUANA POLIONI AL-AHJ; RODRIGO CARDOSO OLIVEIRA; ANA CAROLINA MAGALHÃES. Cell density and solvent are critical parameters affecting formazan evaluation in MTT assay. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 57, n. 3, p. 381-385, 2014-02-25. (09/17360-4, 10/14984-4)

ARANDA SALOMAO, PRISCILA MARIA; DE OLIVEIRA, FLAVIA AMADEU; RODRIGUES, PAULA DANIELLE; AL-AHJ, LUANA POLIONI; DA SILVA GASQUE, KELLEN CRISTINA; JEGGLE, PIA; RABELO BUZALAF, MARILIA AFONSO; DE OLIVEIRA, RODRIGO CARDOSO; EDWARDSON, JOHN MICHAEL; MAGALHAES, ANA CAROLINA. The cytotoxic effect of TiF4 and NaF on fibroblasts is influenced by the experimental model, fluoride concentration and exposure time. PLoS One, v. 12, n. 6, JUN 14 2017. (13/20372-0, 14/16415-8, 09/17360-4, 15/05009-1, 10/14984-4, 13/13484-6)