Expressão gênica, caracterização eletroforética e análise ultra-estrutural de embriões e tecido materno de cadelas no período peri-implantação

• Processo: 10/50708-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Maria Denise Lopes
• Beneficiário: Maria Denise Lopes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão gênica Prenhez Cadelas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cadelas | Expressao Genica | Gestacao | Reconhecimento Materno

Resumo

Na espécie canina o conhecimento da expressão gênica de fatores relacionados à presença dos embriões e a interação materno-fetal responsáveis pelo estabelecimento da gestação é ainda pouco esclarecida. Este trabalho tem como objetivo determinar a expressão de genes candidatos relacionados ao reconhecimento materno da gestação em cadelas, avaliar o perfil protéico em lavados uterinos e tubáricos de fêmeas gestantes e não gestantes e realizar uma análise ultra-estrutural descritiva de embriões e tecido uterino materno no período peri-implantação. Serão utilizadas 20 fêmeas divididas em 2 grupos - GRUPO I (Experimental) - constituídos por 15 cadelas que serão inseminadas nos dias D4 e D6 da onda pré-ovulatória de LH, por via vaginal, com sêmen fresco. Esse grupo será subdividido em Grupo IA - 05 fêmeas submetidas à ovariohisterectomia oito dias após a primeira inseminação; Grupo IB - 05 cadelas em que a ovariohisterectomia será realizada doze dias após a primeira inseminação e Grupo IC - 05 cadelas submetidas à ovariohisterectomia 21 dias após a primeira inseminação. O GRUPO II (Controle)- formado por 05 cadelas, não inseminadas, que serão ovariohisterectomizadas 15 dias após a onda pré-ovulatória de LH. Os genes candidatos serão: metatoproteinase-2 (MMP-2), osteopontinas (OPN), fator inibidor de leucemia (LIF) e dos receptores de progesterona (PR), estrógeno (ER), oxitocina (OTR) e do receptor do fator inibidor de leucemia (LIFR) e será utilizada a técnica de PCR em "tempo real" em tecido uterino materno e embriões das cadelas do subgrupo IA, IB e IC e apenas em tecido uterino das fêmeas do GRUPO II para a detecção destes em embriões, amostras de endométrio e tubas uterinas devidamente congelados a -80°C e posteriormente processados. Para a caracterização eletroforética das proteínas do lavado uterino e tubárico de ambos os grupos será utilizada a técnica de eletroforese bi-dimensional. A avaliação ultra-estrutural dos embriões, útero e tubas uterinas será efetuada baseando-se interpretação das eletromicrografías obtidas após o preparo e processamento adequado das amostras obtidas tanto do grupo controle quanto do grupo experimental. (AU)