O camundongo como organismo modelo: indução de novas mutações

• Processo: 00/06963-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2003
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Silvia Maria Gomes Massironi
• Beneficiário: Silvia Maria Gomes Massironi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutações induzidas Mapeamento genético Genomas Camundongos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Camundongo | Mapeamento Genetico | Mutagenese | Mutagenese Quimica | N-Ethyl-N-Nitrosourea

Resumo

Das várias estratégias existentes que possibilitam o estudo da função de genes de eucariotos, duas formas buscam seu conhecimento através da análise de sua disfunção, ou seja, através da produção de mutantes. A primeira, a qual podemos chamar de mutagênese dirigida, por manipular genes já conhecidos, utiliza-se das técnicas de engenharia genética (knock-out, sistema Cre-Lox, etc). A segunda recorre as mutações que aparecem espontaneamente ou que são produzidas por mutagênese química: ela apresenta a vantagem de não precisar de um conhecimento anterior da estrutura do gene. Esta é também bem mais simples e menos onerosa que a primeira, possuindo a grande vantagem de produzir uma larga gama de mutações (ganho e perda de funções) enquanto a primeira limita-se, até o momento, à produção de alelos nulos de um determinado gene. O projeto apresentado busca induzir novas mutações através do agente químico N-ethyl-N-nitrosourea (ENU), localizá-las no genoma, contribuindo desta forma para o conhecimento da genética de camundongos, fornecendo ainda novos modelos para outros pesquisadores. Para a obtenção de animais mutantes, camundongos da linhagem BALB/c machos serão tratados com a agente mutagênico ENU, que age na espermatogônia gerando mutações pontuais. Após um período de infertilidade de aproximadamente 13 semanas, os machos tratados serão cruzados com fêmeas da mesma linhagem, normais, e seus descendentes analisados fenotipicamente para a seleção de mutantes. Os filhotes dos machos submetidos ao agente mutagênico serão observados com atenção para detectar as mutações dominantes na geração F1. Um protocolo de cruzamento de três gerações será utilizado para recuperar mutações recessivas. Após a obtenção de mutantes, novos cruzamentos serão realizados para a obtenção de linhagens mutantes isogênicas. Dando seqüência ao trabalho, será feito o mapeamento genético das mutações obtidas. De cada três mutações induzidas espera-se que duas codifiquem um gene ainda não conhecido, sendo que a terceira identifica um novo alelo de um gene já conhecido (comunicação pessoal Dr. Jean Louis Guénet). (AU)