Ph-dependent interaction of cytochrome c with mitochondrial mimetic membranes. the role of an array of positively charged residues

• Processo: 05/02606-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Beneficiário: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão e Assuntos Comunitários. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Assunto(s): Espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cytochrome C | Histidine | Inner Mitochondrial Membrane | Lysine | Maldi-Tof | Vesicle Fusion | Outros

Resumo

A interação de citocromo c (cyt c) com vesículas de 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine e cardiolipina de coração (PCPECL) que mimetizam a mitocôndria foi investigada na faixa de pH 7,4 - 6,2 por medidas de turbidez e espectroscopia de foto correlação. Na presença de cit c, o decréscimo de pH induziu um aumento na turbidez e no diâmetro médio das vesículas resultado da fusão de vesículas determinado pelo rápido decréscimo da razão excímero/monômero de fosfatidilcolina 2-(10-(1-pyrene) decanoyl)(PyPC). Cit c N-acetilado e protamina, uma proteína carregada positivamente, aumentou a turbidez das vesículas de maneira independente de pH, enquanto que albumina não afetou a turbidez das vesículas de PCPECL. Cinéticas de turbidez dependentes de pH revelaram um papel para grupos ionizáveis de cit c com um pKa(app) por volta de 7,0. A carbetoxilação destes grupos por dietilpirocarbonato desfavoreceu a fusão de vesículas mediado por cit c, embora a associação de cit c com vesículas manteve-se não afetado. Análises de Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Time-of-Flight (ToF) revelaram que resíduos do cit c Lys22, Lys27, His33 e Lys87 foram os principais alvos de carbetoxilação ocorridos em baixos valores de pH (< 7,5). De fato, estes resíduos de aminoácido que compõem o agrupamento de aminoácidos carregados positivamente, apresentam baixo pKa. Assim, em baixo pH, a protonação destes resíduos de aminoácido invariante e altamente conservados produziu uma região secundária carregada positivamente no lado oposto a região das Lys-72 e Lys-73 na estrutura do cit c. Estes dois sítios opostos permitem que duas vesículas se aproximem pela mesma molécula de cit c para a fusão. Portanto, um novo sítio de associação de cit c com membranas que mimetizam a mitocôndria dependente de pH foi estabelecido neste estudo. (AU)