Attacin, a gene from Trichoplusia ni reduces susceptibility to Xanthomonas axonopodis pv. citri in transgenic Citrus sinensis 'Hamlin'

• Processo: 06/03536-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Beatriz Madalena Januzzi Mendes
• Beneficiário: Beatriz Madalena Januzzi Mendes
• Instituição Sede: Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Transformação genética Cancro (doença de planta) Resistência à doença Citrus Xanthomonas axonopodis Citrus sinensis Publicações de divulgação científica Artigo científico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cancro Citrico | Citrus | Resistencia A Doencas | Transformacao Genetica | Resistencia a doencas

Resumo

O cancro cítrico, causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri, é um dos principais problemas que afetam a produção de citros. Genes de insetos, que codificam proteínas antibacterianas, tem sido utilizados em transformação genética de plantas com o objetivo de se obter resistência a bactérias fitopatogênicas. Neste trabalho, plantas transgênicas de Citrus sinensis cv. Hamlin, expressando o gene da proteína antibacteriana atacina A, foram obtidas por transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. O vetor binário pCattA 2300 foi construído a partir de um clone do cDNA do gene. A construção gênica incluiu o peptídeo sinal nativo responsável por direcionar a proteína para o espaço extracelular, onde a bactéria se acumula in vivo. Com o objetivo de investigar a eficiência do peptídeo sinal num sistema vegetal modelo, células da epiderme de cebola foram transformadas via biobalística, utilizando-se plasmídeos contendo o gene attA com e sem o peptídeo sinal, fusionado com a proteína fluorescente gfp (pattA 1303 e pSPattA 1303). O acúmulo de fluorescência ao redor das células foi observado somente nos tecidos transformados com o plasmídeo contendo o gene com o peptídeo sinal, indicando a secreção da proteína para o apoplasto. A transformação genética de citros foi confirmada por PCR e Southern blot em 12 plantas regeneradas. A transcrição do gene attA foi detectada por Northern blot em todas as plantas transgênicas. Foram selecionadas e propagadas 8 linhagens transgênicas, as quais foram inoculadas com uma suspensão do patógeno X. axonopodis pv. citri. A análise dos resultados permitiu identificar 7 plantas transgênicas com uma redução na suscetibilidade ao cancro cítrico em comparação ao controle não transgênico. Os resultados obtidos indicam o potencial de uso de proteínas antibacterianas para proteger citros de doenças bacterianas. (AU)