Spectroscopic, structural and functional characterization of the alternative low spin state of horse heart cytochrome C

• Processo: 08/02933-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Radiologia e Fotobiologia
• Pesquisador responsável: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Beneficiário: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão e Assuntos Comunitários. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Assunto(s): Hemeproteínas Espectroscopia Micelas reversas Dicroísmo circular Ressonância paramagnética eletrônica Espectroscopia Raman Citocromos c Publicações de divulgação científica Artigo científico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dicroísmo circular magnético (MCD) | hemeproteínas | hexano | Micelas de SDS | Micelas reversas de AOT | Ressonância Eletrônica Paramagnética (EPR) | Ressonância Raman (RR) | Espectroscopia

Resumo

O estado baixo spin alternativo de Fe3+ e Fe2+ de citocromo c (ALSScitc) induzido por micelas de SDS ou por micelas reversas de AOT/hexano foi caracterizado por ressonância eletrônica paramagnética (EPR), Uv-visível, dicroísmo circular (CD) e dicroísmo circular magnético (MCD), espectroscopia de fluorescência e de ressonância Raman (RR) hexano e exibiu o grupo heme com simetria menos rômbica. Consistente com a substituição da Met80 por outro ligante de campo forte na sexta posição de coordenação, o Fe3+ALSScitc exibiu um desvio da banda Soret de 1 nm para o azul bem como um aumento do acompanhado do desaparecimento da banda de transferência de carga em 695 nm. Os espectros de RR, CD e MCD do Fe3+ALSScitc e do Fe2+ALSScitc exibiram mudanças significativas sugestivas de alterações do microambiente do ferro hemínico e também mudanças conformacionais as quais não foram, entretanto, atribuídas à desnaturação da proteína uma vez que a inibição da fluorescência do Trp59 pela proximidade do grupo heme foi mantida. O ALSScitc foi também obtido de citocromo c de cavalo com os resíduos de His33 e His26 carboetoxilados e também a partir de citocromo c de atum, onde a His33 tem a Asn como substituinte, apontando assim a Lys79 como um provável ligante do ferro hemínico. O Fe3+ALSScitc manteve a capacidade de clivar t-butil hidroperóxido e de ser reduzido por ditiotreitol e difenilacetaldeído, mas não por ascorbato. Exibiu um potencial redox em torno de 200 milivolts, menor do que a proteína nativa (+220 mV), e mostrou-se também mais suscetível ao ataque por radicais livres, o que é compatível com uma cavidade do heme mais aberta. (AU)