FBXO25-associated Nuclear Domains: A Novel Subnuclear Structure

• Processo: 08/04590-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Marcelo Damário Gomes
• Beneficiário: Marcelo Damário Gomes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Complexo de endopeptidases do proteassoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Atrogin-1 | Clastossomas | Fands | Fbxo25 | Polyq | Proteassomas | Biologia Celular

Resumo

O sistema ubiquitina-proteassoma (SUP) é responsável pela degradação damaioria (80%) das proteínas intracelulares em eucariotos. Proteínas destinadas àdegradação pelo SUP são primeiramente ligadas covalentemente a uma cadeia deubiquitina, uma proteína de 76 resíduos de aminoácidos, a qual marca essas proteínaspara rápida degradação pelo proteassoma 26S. A seletividade e a regulação dadegradação específica do substrato são determinadas pelas enzimas ubiquitina ligase(E3), uma vez que são as responsáveis pelo reconhecimento do substrato. Nestetrabalho foi realizada a caracterização da distribuição subcelular da E3 ligaseFBXO25.Por experimentos de imunocitoquímica e bioquímica (fracionamento celular)foi mostrado que a proteína FBXO25 endógena apresenta localização nuclear, comdistribuição nucleoplasmática e exclusa do nucléolo. Além disso, verificou-se nonúcleo a presença de corpos subnucleares enriquecidos da proteína FBXO25. Taiscorpos parecem estar associados à estrutura da cromatina e estão presentes apenas nafase G1/telófase do ciclo celular.Através de experimentos de imunofluorescência com dupla-marcação foi vistoque os corpos de FBXO25 apresentam localização e morfologia diferentes quandocomparado aos outros domínios nucleares já bem caracterizados, incluindo osspeckles, corpos de Cajal, gems e clastossomos. Sendo assim, os corpos de FBXO25foram nomeados como "FANDs" (FBXO25 Associated Nuclear Domains).Interessantemente, a inibição da transcrição por actinomicina D ou tratamentode heat-shock provocou a redistribuição dos FANDs para o nucleoplasma, indicandoque estes corpos são estruturas dinâmicas influenciadas pela atividade transcricional dacélula. Entretanto, ensaios de transcrição por incorporação in vivo de Br-UTPmostraram que os corpos de FBXO25 não se concentram em sítios ativos detranscrição no núcleo.Palavras-chave: FBXO25, FANDs, sistema ubiquitina-proteassoma,clastossomos, actinomicina D. (AU)