Caracterização de mecanismos de resistência aos carbapenêmicos de isolados clínicos de Enterobacter spp

• Processo: 11/18438-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2013
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Silvia Figueiredo Costa
• Beneficiário: Silvia Figueiredo Costa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Bolsa(s) vinculada(s): 12/04530-1 - Caracterização de mecanismos de resistência aos carbapenêmicos de isolados clínicos de Enterobacter spp, BP.TT
• Assunto(s): Infectologia Enterobacteriaceae Resistência microbiana a medicamentos Antibióticos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bomba de efluxo | Clonalidade | Enterobacter spp | Membrana externa | Resistência | Infectologia

Resumo

Enterobacter pertence a um grupo de bactérias denominado CESP (Citrobacter spp, Enterobacter spp,Serratia sp e Proteus spp), que são Gram-negativos produtores constitutivos da beta-lactamases cromossômicas, como as enzimas do tipo AmpC que durante o uso de antimicrobianos pode expressar um aumento na produção de resistência e, portanto, a beta-lactâmicos. Assim, com o advento destas estirpes multi-resistentes, a classe mais utilizada de antibióticos por mais de uma década para tratar infecções por estes microrganismos foram os carbapenêmicos. No entanto, a resistência aos carbapenêmicos está começando a surgir e, conseqüentemente, a escolha de uma terapia apropriada é complicada pelo fato de que a maioria dos Enterobacter spp é resistente a muitos agentes antimicrobianos ou podem desenvolver resistência durante o tratamento.Estes patógenos bacterianos podem abrigar uma variedade de mecanismos de resistência aos antibióticos. Entre eles, a modificação da permeabilidade da membrana externa, a deficiência de porinas associados à expressão da atividade de cefalosporinases e de carbapenemases, vem sendo detectada em isolados resistentes aos carbapenêmicos. As carbapenemases pertencem principalmente a duas classes moleculares, que são distinguidas pela conformação de seu sítio ativo, a classe A carbapenemases: (NMC / IMI (Imipenemase / não carbapenemase Metallo-A), SME (Serratiamarcescens enzima), KPC (Klebsiellapneumoniae carbapenemase), GES (Guiana de espectro estendido), e as metallo-²-lactamases da classe B Ambler:IMP (Imipenemase), VIM (Verona Imipenemase), SPM (São Paulo Metalo -lactamase), GIM (Imipenemase alemã), SIM (Seul Imipenemase) e a mais recente DM-1 (New Delhi).Mas poucos estudos sobre o mecanismo de resistência aos carbapenêmicos em isolados de Enterobacter spp foram realizados até o momento. Assim, o objetivo deste estudo será caracterizar o mecanismo de resistência aos carbapenêmicos em 52 isolados de Enterobacter spp de três hospitais brasileiros e determinar sua relação genética e a susceptibilidade aos antimicrobianos.Portanto, para caracterizar os mecanismos de resistência, utilizaremos as seguintes metodologias: suscepptibilidade antimicrobiana será determinanda por microdiluição em caldo para os seguintes antimicrobianos: Imipenem, Meropenem, Ertapenem, Polimixina B, Amicacina, Cefepima, Tigeciclina, Ciprofloxacina, Piperacilina/ Tazobactam e para a Fosfomicina, microdiluíção em ágar. A hidrólise do Imipenem será investigada por ensaios espectrofotométricos e genes de carbapenemases, genes de bomba de efluxo e porinas serão identificados pelo PCR e seu produto amplificado será confirmado pelo seqüenciamento. Para analisar a membrana externa será utilizado o método SDS-PAGE. Para estudar a clonalidade será utilizada a metodologia conhecida como PFGE e para a expressão da bomba de efluxo será realizado a metodologia de PCR em Tempo Real (RT-PCR), ao mesmo tempo será identificado a bomba de efluxo na presença e ausência de inibidores de bomba de efluxo. (AU)