Expressão e caracterização de uma esfingomielinase do veneno da aranha Loxosceles gaucho e de seus de peptídeos gerados por ação de MMPs

• Processo: 11/23590-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2012
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Geraldo Santana Magalhães
• Beneficiário: Geraldo Santana Magalhães
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Ana Maria Moura da Silva ; Katia Cristina Barbaro Nogueira ; Maisa Splendore Della Casa
• Assunto(s): Venenos de origem animal Aranhas Loxosceles gaucho Fosfolipases Peptídeos Clonagem Metaloproteinases da matriz
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem | Expressão fosfolipases | Loxosceles gaucho | MMPs | peptídeos | veneno | clonagem e expressão

Resumo

O veneno de Loxosceles é composto por uma mistura de toxinas capazes de causar intensa reação inflamatória, lesão dermonecrótica, manifestações sistêmicas como agregação plaquetária, anemia hemolítica e falência renal aguda. Em relação à composição química, estudos demonstraram que o veneno loxoscélico é rico em hialurinidases, peptidases, colagenases, fosfatase alcalina, 5´-ribonucleotidase, fosfohidrolases, metaloproteinases e fosfolipases D entre outras. As fosfolipases D (FLDs) também denominadas de toxinas dermonecróticas são as mais estudadas, pois tem sido demonstrado serem responsáveis pelos principais efeitos observados no loxoscelismo. Contudo, uma vez que a quantidade total de veneno é pequena, torna-se difícil obter a quantidade necessária destas toxinas para estudos biológicos e caracterização bioquímica. Por isto, a estratégia de clonagem e expressão destas toxinas na forma recombinante tem sido amplamente empregada. Apesar da importância do veneno de L. gaucho, até o presente momento nenhuma FLDs desta aranha foi clonada e expressa a fim de obter maior quantidade para realizar estudos funcionais e comparativos. Portanto neste projeto, temos como objetivo expressar uma FLD de L. gaucho em sistema bacteriano e avaliar sua atividade biológica in vivo e in vitro. Além disto, como resultados preliminares indicaram um possível processamento das FLDs por metaloproteinases, pretendemos isolar, caracterizar e gerar anticorpos contra estes peptídeos a fim de avaliar seu uso na neutralização contra o veneno total. Dessa maneira, os estudos aqui propostos serão importantes para a compreensão dos mecanismos de ação das FLDs de forma a contribuir para o entendimento dos processos envolvidos no envenenamento provocado pelas aranhas do gênero Loxosceles. (AU)