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Expressão e caracterização de uma esfingomielinase do veneno da aranha Loxosceles gaucho e de seus de peptídeos gerados por ação de MMPs

Resumo

O veneno de Loxosceles é composto por uma mistura de toxinas capazes de causar intensa reação inflamatória, lesão dermonecrótica, manifestações sistêmicas como agregação plaquetária, anemia hemolítica e falência renal aguda. Em relação à composição química, estudos demonstraram que o veneno loxoscélico é rico em hialurinidases, peptidases, colagenases, fosfatase alcalina, 5´-ribonucleotidase, fosfohidrolases, metaloproteinases e fosfolipases D entre outras. As fosfolipases D (FLDs) também denominadas de toxinas dermonecróticas são as mais estudadas, pois tem sido demonstrado serem responsáveis pelos principais efeitos observados no loxoscelismo. Contudo, uma vez que a quantidade total de veneno é pequena, torna-se difícil obter a quantidade necessária destas toxinas para estudos biológicos e caracterização bioquímica. Por isto, a estratégia de clonagem e expressão destas toxinas na forma recombinante tem sido amplamente empregada. Apesar da importância do veneno de L. gaucho, até o presente momento nenhuma FLDs desta aranha foi clonada e expressa a fim de obter maior quantidade para realizar estudos funcionais e comparativos. Portanto neste projeto, temos como objetivo expressar uma FLD de L. gaucho em sistema bacteriano e avaliar sua atividade biológica in vivo e in vitro. Além disto, como resultados preliminares indicaram um possível processamento das FLDs por metaloproteinases, pretendemos isolar, caracterizar e gerar anticorpos contra estes peptídeos a fim de avaliar seu uso na neutralização contra o veneno total. Dessa maneira, os estudos aqui propostos serão importantes para a compreensão dos mecanismos de ação das FLDs de forma a contribuir para o entendimento dos processos envolvidos no envenenamento provocado pelas aranhas do gênero Loxosceles. (AU)

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