Investigação in vitro de nucleosídeos modificados: potenciais biomarcadores tumorais de câncer de pâncreas

• Processo: 12/50579-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Analítica
• Acordo de Cooperação: CNPq - Programa Primeiros Projetos
• Pesquisador responsável: Ana Valéria Colnaghi Simionato
• Beneficiário: Ana Valéria Colnaghi Simionato
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Neoplasias pancreáticas Biomarcadores tumorais Reação em cadeia por polimerase (PCR) Espectrofotometria ultravioleta Cromatografia líquida Eletroforese capilar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Molecular | Biomarcadores Tumorais | Cancer De Pancreas | Eletroforese Capilar | Nucleosideos Modificados

Resumo

O câncer tem sido uma preocupação mundial, não apenas em nível de saúde pública, mas também como fator econômico-social. Ultimamente, essa doença é classificada como a terceira maior causa de mortes no mundo, o que justifica a investigação para melhorias no diagnóstico e tratamento da mesma. Dentre as diversas patologias de base, o câncer de pâncreas é o décimo mais comum. Porém, sua extrema agressividade e mortalidade são motivos para intensa pesquisa de ferramentas de diagnóstico precoce. O diagnóstico do câncer de pâncreas é feito por exames laboratoriais, exames de imagem e biópsia, sendo o último realizado apenas com resultados 5 indicativos da presença da patologia obtidos com os demais. Os exames laboratoriais de rotina incluem a quantificação do biomarcador antígeno carboidrato 19-9 (CAI 9-9). Porém, este biomarcador pode gerar resultados falso-positivos, fazendo com que o indivíduo seja submetido a exames mais invasivos e, muitas vezes, desnecessários. Neste projeto, propõe-se a investigação in vitro (meios de cultura de células humanas sadias e com câncer de pâncreas) e in vivo (soro sanguíneo de indivíduos sadios e com câncer de pâncreas) de nucleosídeos modificados - potenciais, biomarcadores tumorais de pâncreas. Estes metabólitos são normalmente sintetizados em indivíduos sadios. Porém, no caso de neoplasias, a concentração dos mesmos é elevada. Concomitantemente, serão investigadas as enzimas adenosina deaminase (ADAR) e inosina monofosfato desidrogenase (IMPDH) em ambos os meios, para determinar suas diferentes expressões em caso de neoplasia e suas relações com a síntese de nucleosídeos modificados. Para isso, serão empregadas técnicas de análise por reação da polimerase em cadeia (PCR), PCR em tempo real (PCR-RT), espectrofotometria UV-visível e eletroforese em microchip para sequenciamento e quantificação do RNA extraído das amostras. Já os nucleosídeos modificados presentes no sobrenadante dos meios de cultura e no soro sanguíneo serão extraídos em coluna de afinidade e analisados quali e quantitativamente por eletroforese capilar com detecção na região do UV-visível (CE-UV) e, se necessário, por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em tandem (UPLC- MS/MS). Os resultados obtidos serão avaliados por técnicas de análise multivariadas, através de modelos de classificação baseados na análise de componentes principais (PCA) e método dos quadrados mínimos parciais para análise discriminante (PLS-DA), para separação entre os grupos de indivíduos (sadios e doentes). Tais estudos reforçarão as conclusões sobre o caráter de um grupo de nucleosídeos ou um nucleosídeo em particular como biomarcador(es) de câncer de pâncreas, constituindo uma abordagem de sistema biomolecular. (AU)