Padronização e validação de PCR em tempo real para certificação sanitária de embriões de bovinos produzidos in vitro

• Processo: 14/50169-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Juliana Hayashi Tannura
• Beneficiário: Juliana Hayashi Tannura
• Empresa: In Vitro Brasil Ltda
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/01176-0 - Padronização e validação de PCR em tempo real para certificação sanitária de embriões de bovinos produzidos in vitro, BP.TT
• Assunto(s): Reação em cadeia por polimerase (PCR) Bovinos Fertilização in vitro Embrião de animal
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bovino | Embrioes | Fertilizacao In Vitro | Pcr | Sanidade | Virus

Resumo

A produção de embriões in vitro (PIV) aumentou significativamente durante a última década. Grande parte deste crescimento ocorreu no Brasil. Em 2011, 373.836 embriões produzidos in vitro foram transferidos para receptoras, sendo que o Brasil contribuiu com 85% deste total (Stroud, 2012). Com relação aos controles sanitários há apenas legislação para comércio de embriões coletados in vivo (Resolução MERCOSUL, IN 23/2013). Com relação a PIV há restrições no comércio internacional devido à falta de uma metodologia diagnostica validada para avaliar os riscos sanitários de embriões. A carência de dados científicos dificulta as autoridades sanitárias a estabelecer mecanismos preventivos que possam aumentar a segurança sanitária dos embriões FIV. Vários pontos críticos são detectados nos procedimentos de FIV, amplificando o potencial de introduzir contaminantes virais e protozoários, sendo eles: fonte do oócito doador, sêmen, a quantidade de manipulação e exposição aos meios contendo produtos de origem animal (soro, albumina de soro bovino e co-cultivo com células somáticas). Portanto, precauções adicionais e testes sanitários são necessários para validar a segurança e a saúde de embriões PIV. Dentre os patógenos relacionados com problemas reprodutivos e potencialmente transmissíveis por embrião se destacam o vírus da diarréia bovina (BVDV), Herpesvirus bovino (BoHV), o vírus da língua azul (BTV), o vírus da leucemia bovina (BLV) e o Neospora caninum (OIE, 2012). Considerando os fatos acima relacionados, os objetivos do projeto proposto são: 1) validar metodologias diagnosticas confiáveis de PCR em tempo real (qPCR) para detecção dos vírus da diarréia bovina (BVDV), herpesvirus bovino (BoHV), língua azul (BTV), leucemia bovina (BLV) e do protozoário Neospora caninum, 2) testar os insumos utilizados para a produção de embriões bovinos in vitro (soro albumina bovina, soro fetal bovino e sêmen), 3) avaliar o efeito no embrião quando exposto aos agentes supracitados e avaliar meios e embriões não-desenvolvidos como indicadores válidos de contaminação de embriões. Os resultados do projeto contribuirão com dados científicos para tomada de decisão sobre a legislação sanitária brasileira para produzir embriões PIV certificados sanitariamente para o comércio internacional e além disso poderão ser compartilhados com a IETS e OMSA para colaborar no desenvolvimento de um protocolo universalmente reconhecido para a saúde e a segurança dos embriões PIV. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DA SILVA CARDOSO PINTO, V.; ALVES, M. F.; DE SOUZA NUNES MARTINS, M.; BASSO, A. C.; TANNURA, J. H.; PONTES, J. H. F.; SANTOS LIMA, M.; GARCIA DA SILVA, T.; OKUDA, L. H.; STEFANO, E.; et al. Effects of oocytes exposure to bovine diarrhea viruses BVDV-1, BVDV-2 and Hobi-like virus on in vitro-produced bovine embryo development and viral infection. Theriogenology, v. 97, p. 67-72, JUL 15 2017. (14/50169-4)