Clonagem e expressão da nucleoproteína do vírus da bronquite infecciosa em sistemas hospedeiros eucarióticos (Pichia pastoris) e procarióticos (Escherichia coli)

• Processo: 05/54275-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
• Pesquisador responsável: Helio Jose Montassier
• Beneficiário: Aliandra Maura Gibertoni Malaman
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 01/14950-3 - Bronquite infecciosa das galinhas: interações entre variabilidade genética e antigênica em estirpes do vírus da bronquite infecciosa e reflexos sobre a imunidade, o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia, AP.TEM
• Assunto(s): Imunogenicidade Clonagem Purificação de proteínas Expressão gênica Expressão de proteínas Vírus da bronquite infecciosa Pichia pastoris Escherichia coli
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Expressao | Imunogenicidade | Purificacao | Virus Da Bronquite Infeccciosa

Resumo

A proposta principal do presente projeto é fazer a clonagem e a expressão do gene da nucleoproteína (N) de duas estirpes do vírus da bronquite infecciosa (VBI), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina e o epítopo V5 na extremidade carboxi - terminal, em 2 sistemas hospedeiros diferentes isto é leveduras da espécie, Picchia pastoris linhagem, GS115 e na bactéria, Escherichia coli linhagem, BL21(DE). Serão avaliados os níveis de expressão da proteína N recombinante em cada um desses sistemas hospedeiros de expressão, bem como serão determinadas as características bioquímicas e imunoquímicas de tais proteínas recombinantes, por meio das técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE-SDS) e Western-Blotting. Uma vez obtidas e caracterizadas, essas proteínas N recombinantes, elas serão purificadas pela técnica de cromatografia de afinidade em níquel-agarose, para então serem utilizadas como antígenos alvo de ensaios indiretos de ELISA, que serão desenvolvidos e aplicados na detecção e mensuração de anticorpos em aves infectadas ou vacinadas com o VBI e, será, também, investigada a atividade imunogênica dessas proteínas recombinantes em galinhas, que depois de imunizadas e re-imunizadas com essas proteínas recombinantes, serão submetidas ao desafio com estirpe virulenta do VBI. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

A.M. GIBERTONI; M.C.M. GONÇALVES; M.F.S. MONTASSIER; C.C. FERNANDES; H.J. MONTASSIER. CLONAGEM, EXPRESSÃO E CARACTERIZAÇÃO DA NUCLEOPROTEÍNA RECOMBINANTE DO VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA EM ESCHERICHIA COLI E EM PICHIA PASTORIS. Arq. Inst. Biol., v. 77, n. 1, p. 1-9, 2020-10-19. (05/54275-4)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MALAMAN, Aliandra Maura Gibertoni. Clonagem e expressão do gene da nucleoproteína do vírus da bronquite infecciosa em sistemas hospedeiros eucarioto (Pichia pastoris) e procarioto (Escherichia coli). 2009. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias. Jaboticabal Jaboticabal.