Bases moleculares da especificidade pelo substrato em b-glicosidases

• Processo: 06/52476-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2006
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Marana
• Beneficiário: Lúcio Mário Ferreira de Mendonça
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): beta-Glicosidases Mutagênese sítio-dirigida
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aglicone | Beta-Glicosidases | Especificidade | Evolucao Dirigida | Mutagenese Sitio Dirigida | Ph Otimo

Resumo

O sítio ativo das beta-glicosidases é dividido em duas porções: o subsítio de ligação do monossacarídeo da extremidade redutora do substrato (glicone) e a região que liga o remanescente do substrato (aglicone), porém o papel destes resíduos na determinação da especificidade pelo substrato nunca foi estudado. Um dos objetivos deste projeto é analisar o papel dos resíduos E190, E194 e K201 na determinação da especificidade pelo substrato em uma beta-glicosidase de Spodoptera frugiperda (Sfbgli50 - AF052729) através do uso de mutagênese sítio-dirigido e experimentos de cinética enzimática. A Sfbgli50 - AF052729 têm um pH ótimo de 6,2, o qual é determinado por uma rede de interações entre E399 (nucleófilo catalítico), E187 (ácido catalítico), R97 e Y331. Modificações nesta rede de interações produzidas através de mutagênese sítio-dirigido alteram o pH ótimo da Sfbgli50. Porém, estas enzimas mutantes têm baixa atividade catalítica, sugerindo que mutações em outros pontos da Sfbgli50 podem ser necessários para combinar modificação do pH ótimo e alta atividade catalítica. A localização destes novos pontos de mutação é dificultada pelo grande número de aminoácidos da Sfbgli50 (509). Deste modo, o segundo objetivo deste projeto é selecionar Sfbgli50 que apresentem pH ótimo alterado a partir de uma biblioteca de mutantes construída a partir de mutagênese in vivo. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MENDONÇA, Lúcio Mário Ferreira de. Bases moleculares da especificidade pelo substrato em β-glicosidases. 2009. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.