Caracterizacao bioquimica e funcional de proteinas que interagem com a subunidade catalitica da fosfatase do tipo 1 (pp1c) na ameba social dictyostelium discoideum.

• Processo: 07/56976-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aline Maria da Silva
• Beneficiário: Renato Astolfi Raposo
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Monoester fosfórico hidrolases Interação proteína-proteína Duplo-híbrido Transdução de sinais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dictyostelim Discoideum | Duplo-Hibrido | Fosfatases | Interacao Proteina-Proteina | Perfil De Expressao | Sinalizacao Celular

Resumo

As serina/treonina fosfatases (PPs) são enzimas que catalisam a desfosforilação específica de resíduos de fosfoserina e fosfotreonina. Considerando-se especialmente a identidade entre as seqüências de aminoácidos de suas subunidades ou domínios catalíticos, as PPs foram agrupadas em duas famílias: PPP (PhosPhoprotein Phosphatase) e PPM (Phosphoprotein Phosphatase Magnesium-dependent). A família PPP, engloba, entre outras subfamílias, a subfamília da proteína fosfatase do tipo-1 (PP1), a qual é uma das principais PPs encontradas nas células eucarióticas. Sua subunidade catalítica (PP1c) não existe livremente nas células, mas sim em associação com uma ou mais subunidades não-catalíticas que modulam sua localização subcelular, especificidade de substrato e atividade enzimática. Estudos recentes realizados em nosso grupo resultaram na identificação de algumas proteínas que interagem e possivelmente modulam a atividade da PP1 de D. discoideum (DdPPIc). Para estes estudos foram utilizadas tanto buscas por similaridades na seqüência genômica deste microorganismo como ensaios utilizando o sistema de duplo-híbrido em leveduras, utilizando-se a DdPPIc como isca. Com essa abordagem, foram selecionados mais de 30 clones distintos de cDNA que codificam proteínas (presas) que interagiram com a DdPPIc. Nesse projeto temos como objetivos: (1) confirmar as interações identificadas nos ensaios de duplo híbrido com a isca DdPPIc utilizando outros ensaios tais como overlay e/ou co-imunoprecipitação, utilizando-se anticorpos anti-PP1c e anti-HA, um epitopo ao qual as proteínas candidatas estão fusionadas; (2) avaliar a função de duas proteínas que potencialmente interagem com a DdPPIc selecionadas após os ensaios confirmatórios de sua interação com a DdPPIc, através de diversas abordagens tais como análise do perfil de expressão de seus respectivos genes durante crescimento e desenvolvimento de D.discoideum e determinação de sua localização sub-celular por imunofluorescência. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

RAPOSO, Renato Astolfi. Análise de interações da subunidade catalítica da fosfatase do tipo 1 (PP1c) de Dictyostelium discoideum identificadas através do sistema de duplo-híbrido em leveduras. 2010. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.