Desenvolvimento de processo cromatográfico para purificação de fator VIII humano: emprego de anticorpos contra fragmentos específicos da proteína na avaliação da pureza e estabilidade durante as etapas de purificação

• Processo: 05/57615-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2006
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Elizabeth Angelica Leme Martins
• Beneficiário: Daniela Jinzenji
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Fator VIII Cromatografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromatografia | Fator Viii | Hemoderivados | Proteinas Do Plasma | Purificacao De Fator Viii

Resumo

A hemofilia A é a desordem no processo de coagulação mais frequente na espécie humana, caracterizada pela deficiência ou ausência de atividade do fator VIII da cascata de coagulação. Tem caráter genético recessivo, afetando entre 6000 a 12000 pessoas no Brasil. O tratamento é feito com a administração deste fator, obtido da purificação de frações plasmáticas ou de recombinação genética. Atualmente, a maior parte dos hemoderivados utilizada é importada, apesar de haver disponibilidade de plasma nos hemocentros do país. O Instituto Butantan tem trabalhado em processos de purificação de proteínas do sangue com aplicação clínica, com o objetivo eventual de instalar uma fábrica para produção de hemoderivados e aproveitamento do plasma. O método principal para purificação de proteínas a partir de plasma baseia-se na crioprecipitação e fracionamento por precipitação alcoólica. O Instituto Butantan propõe o desenvolvimento de métodos alternativos usando cromatografias para esta purificação, o que tornaria o processo de obtenção mais econômico e eficiente. A utilização de tecnologias imunológicas e de recombinação genética auxiliaria na avaliação dos procedimentos e dos produtos obtidos. Neste projeto pretendemos: otimizar o método de purificação empregando cromatografia de troca iônica seguida de gel filtração, comparando com o método validado pela GE Healthcare que prevê a cromatografia por gel filtração direta do plasma; obter anticorpos contra fragmentos da proteína fator VIII e utilizar esses anticorpos na avaliação da pureza e estabilidade do fator VIII durante o processo de purificação. (AU)