Estudo da expressao diferencial de genes envolvidos no controle do crescimento axonal durante o desenvolvimento de cerebelo.

• Processo: 06/05371-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2007
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Marimélia Aparecida Porcionatto
• Beneficiário: Maria Emilia de Oliveira Brenha Ribeiro
• Instituição Sede: Departamento de Bioquímica. Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neurobiologia Neurônios
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Da Agila | Crescimento Axonal | Desenvolvimento Do Cerebro | Neuronios | Neurobiologia

Resumo

O número de funções atribuídas às células da glia no desenvolvimento dos neurônios é cada vez maior, porém os mecanismos moleculares relacionados a essas funções ainda não foram completamente elucidados. Nossos resultados anteriores demonstram que o meio condicionado por células da glia incrementa o crescimento axonal de precursores de células granulares (principal neurônio do cerebelo) em até duas vezes, sendo que quanto mais novo o animal do qual obtivemos as células, maior foi crescimento axonal. Outra observação feita por nós é que tal fenômeno só o ocorre quando tanto os precursores neuronais quanto as células da glia são da mesma idade. Quando as células são de idades diferentes, o crescimento é similar ao visto sem a adição do meio condicionado, ou seja, a expressão de fatores estimuladores do crescimento por células da glia e a capacidade responsiva dos neurônios são dois eventos idade-dependentes. De modo a tentar identificar quais seriam os genes responsáveis pelo controle do crescimento axonal e também em qual período do desenvolvimento seriam expressos, utilizamos a metodologia RDA (Representational Differential Analysis) com amostras de RNA de células da glia e neurônios obtidos de cerebelos de animais de 3 e 9 dias pós-natal. Esperamos através desta metodologia, encontrar os genes expressos diferencialmente em cada tipo celular estudado. Assim sendo, os objetivos deste projeto são validar a expressão dos genes encontrados através da RDA. Esta validação será feita através de RT-PCR, na qual a partir da seqüência do gene serão desenhados pares de primers que serão utilizados em reações cujos substratos serão mRNAs das células da glia e neurônios da idades estudadas. Além do RT-PCR, faremos a validação por hibridização in situ, na qual se detectará a expressão do mRNA referente aos genes encontrados através das respectivas sondas em cortes de cerebelos de camundongos de diferentes idades pós-natal. Paralelamente à identificação e validação de genes diferencialmente expressos por RDA, estudaremos a expressão do gene nogo através de RT-PCR utilizando primeiramente primers específicos para o C-terminal comum às três isoformas resultantes da expressão desse gene. Dados da literatura mostram que a proteína Nogo-A é uma das principais proteínas responsáveis pela inibição de crescimento axonal após lesão no sistema nervoso central. No desenvolvimento normal do sistema nervoso central, as isoformas Nogo-A, -B e –C são expressas por diversos neurônios, entre eles os neurônios cerebelares e sua expressão varia com a idade. No entanto, não se conhece o papel fisiológico dessas proteínas no desenvolvimento do cerebelo. Sendo assim, o gene nogo mostra-se um excelente gene candidato para o controle do crescimento axonal durante o desenvolvimento cerebelar.