Mapeamento de resíduos de aminoácidos no sítio do grupo prostético em complexo não covalentes de apohemoproteinas contendo porfirinas fotossensíveis

• Processo: 05/03424-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2006
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica
• Pesquisador responsável: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Beneficiário: Clemerson Fabricio Balbino Dias
• Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão e Assuntos Comunitários. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Assunto(s): Porfirinas Oxigênio singleto Fotoquímica Terapia fotodinâmica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apocitocromo C | Complexos Nao Covalentes | Fotoquimica | Oxigenio Singlete | Porfirinas | Terapia Fotodinamica | Fotoquímica

Resumo

Porfirinas são compostos cíclicos formados por anéis pirrólicos unidos por pontes metilênicas que apresentam propriedades catalíticas e de fotossensibilização. As porfirinas também desempenham importantes papéis em sistemas biológicos e podem estar associadas a diferentes metais de transição como o ferro, o cobalto e o magnésio. A protoporfirina IX (heme) é o grupo prostético de várias proteínas globulares pertencentes à classe das hemoproteínas que inclui a hemoglobina, a mioglobina, as peroxidases e os citocromos. Nestas hemoproteínas, a remoção do grupo heme resulta na perda da estrutura tridimensional da proteína com formação da apohemoproteína. As apohemoproteínas exibem a capacidade de se enovelar em torno da protoporfirina IX ou outras porfirinas que lhes sejam fornecidas formando hemoproteínas na forma de complexos não covalentes com porfirinas. A estrutura destes complexos, especialmente no que concerne ao bolsão do heme é bem pouco estudada. Neste projeto pretendemos utilizar a capacidade de fotossensibilização de Protoporfina IX e outras porfirinas tais como Protoporfirina IX zinco-substituída e Photofrin para mapear resíduos de aminoácidos que se posicionam nas vizinhanças do grupo prostético. Para tanto, faremos a incorporação das porfirinas em diferentes apohemoproteínas tais como as derivadas de citocromo c, HRP, hemoglobina e mioglobina em atmosfera inerte e no escuro. Em seguida, irradiaremos em diferentes tempos, alíquotas destas amostras, em atmosfera inerte e na presença de oxigênio. Em seguida analisaremos por espectrometria de massa MALDI-ToF os aminoácidos que sofreram oxidação. O padrão de danos oxidativos obtidos nas duas condições será comparado com aquele obtido para as apohemoproteínas irradiadas na presença de azul de metileno em atmosfera inerte e na presença de oxigênio. Existe a possibilidade de que nos complexos não covalentes os aminoácidos localizados nas vizinhanças da porfirina sejam preferencialmente oxidados e o padrão de danos obtidos nestes complexos em comparação com apohemoproteínas seja um indicador da localização dos aminoácidos vizinhos ao grupo prostético nos complexos não covalentes.