| Processo: | 07/01615-8 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Data de Início da vigência: | 01 de fevereiro de 2008 |
| Data de Término da vigência: | 31 de agosto de 2009 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas |
| Pesquisador responsável: | Richard John Ward |
| Beneficiário: | Lucas Ferreira Ribeiro |
| Instituição Sede: | Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Enzimas Indústria de celulose e papel |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | biobranqueamento | Desenho racional | Enzimas Bifuncionais | PCR overlap | polpa kraft | Xilanase-Lacase | Bioquímica-Biotecnologia |
Resumo Os processos convencionais de branqueamento de polpas celulósicas envolvem a utilização de reagentes químicos que são altamente poluentes e conferem às indústrias de celulose a condição de ser uma das mais poluidoras, dentre todo o seguimento industrial. Neste trabalho pretendemos construir uma enzima bifuncional com atividade xilanase (EC 3.2.1.8) e lacase (EC 1.10.3.2), que aja sobre os principais compostos na madeira que dificultam o branqueamento da polpa Kraft, a xilana e a lignina, respectivamente. O uso de enzimas no pré-tratamento da polpa diminui a quantidade de insumos químicos necessária nessa etapa.Um gene quimera, cotA-xylA, que codifica as enzimas lacase (CotA, 65 kDa) e xilanase(XylA, 21.2 kDa) de Bacillus subtilis será construído através de PCR overlap, em que a região codificadora da xilanase será inserida dentro do gene da lacase. Observou-se que este tipo de construção evita um possível bloqueio dos sítios ativos das enzimas individuais, criando domínios separados e mantêm a estabilidade da proteína. Os genes serão clonados em pGEM-T easy e a enzima bifuncional será expressada em sistema de Escherichia coli utilizando o plasmídeo pET28a(+). Após a purificação da enzima bifuncional, será feito ensaios de caracterização enzimática com objetivo de verificar as alterações cinéticas ocorridas devido à fusão. Em adição, a funcionalidade da enzima construída em relação aos processos de biobranqueamento da polpa Kraft será avaliada. | |
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