Produção de glicerol quinase de Pichia pastoris

• Processo: 08/56934-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Edwil Aparecida de Lucca Gattas
• Beneficiário: Raquel Aizemberg
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Glicerol quinase Pichia pastoris
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Glicerol Quinase | Otimizacao Do Processo | Pichia Pastoris

Resumo

O trabalho proposto neste projeto baseia-se na indução da produção e estudo cinético da enzima glicerol quinase (GK; EC 2.7.1.30; ATP: glicerol 3-fosfotransferase), excretada pela levedura Pichia pastoris geneticamente modificada, parte do projeto Fapesp nº 08/53661-6. Esta enzima, utilizada na dosagem de glicerol, catalisa a conversão deste em glicerol-3-fosfato, que utiliza íons Mg++ e ATP. A dosagem do glicerol envolve uma segunda reação de oxidação do glicerol-3-fosfato pela glicerol-3-fosfato desidrogenase, GPD (sn-glicerol-3-:NAD+ 2 oxidoredutase, EC 1.1.1.8) com geração de NADH, que vem sendo desenvolvido no projeto Fapesp nº 06/58982-0. O deslocamento do equilíbrio de reação para leitura da concentração do NADH gerado, correspondente a concentração do glicerol consumido, dependerá da expressão de altas quantidades das enzimas envolvidas. Este estudo de indução será realizado em diferentes meios de cultura e temperatura de crescimento da levedura Pichia pastoris, desenhada para produzir a enzima extracelularmente no meio de crescimento. Estudos para otimização das condições cinéticas da enzima glicerol quinase serão realizados para os parâmetros temperatura e pH de reação, temperatura e pH de estabilidade e efeito da adição de diferentes metais no meio de reação. Através da utilização de delineamentos experimentais adequados será possível estudar o efeito destas variáveis na atividade da enzima. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

AIZEMBERG, Raquel. Produção de glicerol quinase em Pichia pastoris. 2011. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Araraquara Araraquara.