Efeito de polímeros e sais na estabilidade da proteína verde fluorescente GFP

• Processo: 08/01702-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Thereza Christina Vessoni Penna
• Beneficiário: Letícia Celia de Lencastre Novaes
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Polímeros (química orgânica)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Gfp | Peg | polímero | termoestabilidade | Estabilidade de Proteínas

Resumo

Diversos polímeros têm sido utilizados para estabilizar proteínas, seu efeito na estabilidade é dependente das características da proteína, podendo, e em certos casos, causar diminuição de estabilidade. Nos últimos anos soluções de polímeros de cadeia flexível têm mostrado inúmeras aplicações, principalmente seu uso para separação de macromoléculas de um mistura natural complexa, sendo uma poderosa técnica para isolar e purificar proteínas. Extrações em sistemas aquosos bifásicos (constituídos por PEG e sais) são utilizadas para isolar e purificar proteínas de interesse e aplicação biotecnológica em larga escala, como é o caso da GFP. A utilização de eletrólitos em associaçào com sistemas contendo polímeros é comum, a presença de sais pode estabilizar, desestabilizar ou não ter efeito na estabilidade da proteína dependendo do tipo, da concentração, natureza das interações iônicas e resíduos carregados na proteína. A proteína verde fluorescente (GFP) é resistente ao calor (T e 95°C), ao pH alcalino e a alguns agentes químicos. Sua desnaturação térmica é altamente reprodutível e a variação da intensidade de fluorescência pode ser facilmente determinada por espectrofluorimetria, tornando o método rápido e preciso. O objetivo deste projeto é estudar o comportamento da GFP na presença de diferentes soluções aquosas de polímeros e sais. A termoestabilidade da GFP, em diferentes temperaturas, na presença de polietilenoglicol (com diferentes massas molares), dextrana, ácido poliacrilato, citrato e fosfato será investigada. Para isso será observado o decaimento da fluorescência da GFP, em função da temperatura e do tempo, na presença dos polímeros e dos sais propostos; sem e com o auxilio do 8-ANS (1-anilina 8-naftaleno sulfonato). Através dos resultados obtidos será possível obter parâmetros termodinâmicos da desnaturação da proteína. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

NOVAES, Letícia Celia de Lencastre. Efeito de polímeros e sais na estabilidade térmica da proteína verde fluorescente (GFP). 2009. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.