Caracterização do putativo gene CDK7 e seu possível papel nos endociclos e desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana

• Processo: 09/11276-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Fábio Siviero
• Beneficiário: Adam Arai Martens
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia do desenvolvimento Rhynchosciara
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: amplificação | Biologia molecular | Cdk7 | Endociclo | Rhynchosciara | Biologia do Desenvolvimento

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo caracterizar um gene de uma putativa quinase dependente de ciclina e analisar sua possível atuação nos endociclos presentes nos diferentes tecidos de Rhynchosciara americana. Interessantemente, um transcrito correspondente a este gene foi identificado em uma biblioteca de cDNA de glândulas salivares, a qual foi construída com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o último ciclo replicativo da politenização e inicio da amplificação gênica de diferentes pufes de DNA. Entretanto, foram identificadas somente duas mensagens de CDKs (CDK7 e Cdc2) e uma mensagem de ciclina, sendo que sua atuação em processos de endoreplicação ainda não está muito clara, bem como a ausência de outros componentes do endociclo, tornando a caracterização e estudo do gene e seu papel extremamente interessante. A fim de caracterizar o putativo gene Cdk7, pretende-se clonar as porções 5' e 3' de seu mensageiro através de RACE e utilizar o cDNA completo como sonda para uma varredura de uma biblioteca genômica construída em fagos. O clone genômico será utilizado para localização cromossômica deste gene por meio de hibridização in situ fluorescente (FISH) e para seqüenciamento. O perfil de expressão será traçado por RT-PCR em tempo real em glândula salivar e outros tecidos em diferentes fases do desenvolvimento e complementado por western blots, com uso de anticorpo específico contra CDK7 de Rhynchosciara. A análise de imunoblots de eletroforese 2D de extratos celulares seria utilizada para determinar outras informações sobre CDK7, tais como possíveis isoformas e modificações pós-traducionais em diferentes tecidos ou fases do desenvolvimento.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MARTENS, Adam Arai. Caracterização do gene CDK7 e análise de sua possível atuação nos endociclos de Rhynchosciara americana.. 2012. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.