Contribuição do aumento do estresse oxidativo via NAD(P)H oxidase para a hipertrofia glomerular e albuminúria de ratos espontaneamente hipertensos e diabéticos

• Processo: 09/07998-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2009
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Jose Butori Lopes de Faria
• Beneficiário: Lucas José Aoki
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 07/51137-5 - Contribuicao do aumento do estresse oxidativo via nad(p)h oxidase para a hipertrofia glomerular e albuminuria de ratos espontaneamente hipertensos e diabeticos., AP.R
• Assunto(s): Nefrologia Nefropatias diabéticas Tempol Estresse oxidativo Hipertensão
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estresse oxidativo | hipertensão arterial | nefropatia diabética | tempol | Nefrologia

Resumo

Recentemente demonstramos que a presença da hipertensão arterial exacerba o estresse oxidativo renal e determina o desenvolvimento precoce de hipertrofia glomerular e albuminúria em ratos diabéticos. Os objetivos do presente trabalho são investigar se: 1. o aumento do estresse oxidativo está associado a hipertrofia glomerular e aumento da albuminuria; 2. a ativação da via NAD(P)H oxidase e/ou o sistema anti-oxidante (SOD) é/são responsável(is) pelo aumento do estresse oxidativo e pelas alterações renais; 3. o aumento do estresse oxidativo contribui para a maior expressão renal do p27 e para perda de podócitos, alterações envolvidas na hipertrofia glomerular e albuminúria, respectivamente. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) com 4 semanas de idade controles e tornados diabéticos com estreptozotocina serão randomizados para não receberem nenhum tratamento, ou apocinina (um inibidor da NAD(P)H oxidase ou tempol (age como anti-oxidante por mimetizar a ação da SOD, uma enzima anti-oxidante). A pressão arterial será determinada antes e 10 e 20 dias após a indução do DM. Os ratos serão sacrificados 20 dias após a indução do DM quando será determinado: a expressão renal do dano ao DNA induzido pelo estresse oxidativo (imunohistoquímica para 8-HdG), expressão renal de nitrotirosina (marcador de estresse oxidativo e nitrosativo), atividade da NAD(P)H oxidase, expressão de subunidades da NAD(P)H oxidase: p47phox, gp91phox, RAC 1, expressão renal de enzimas anti-oxidantes: SOD, glutationa e hemeoxigenase 2, expressão renal de fibronectina, volume glomerular e albuminúria.Plano de trabalhoO plano é que a (o) candidata(o) apreenda e possa executar o maior número detécnicas necessárias para o desenvolvimento do projeto. Além do manuseioe indução de diabetes mellitus nos ratos, as técnicas incluem: glicemia, determinação da albuminúria por imunodifusão radial, imunohistoquímica com diferentes anticorpos, extração de proteína do tecido renal, quantificação da mesma pelo método de Bradford, eletroforese de proteínas e "blot" (Western blot), imunohistoquímica e imunofluorescência. A avaliação da capacidade de aprendizado e execução da(o) candidata(o) irá determinar a definição das suas atribuições dentro do projeto.