Efeito do Consumo Crônico de Etanol sobre a Reatividade à Adrenomedulina e os Níveis de RNAm dos Componentes desse Sistema em Leito Mesentérico de Ratos

• Processo: 09/09442-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Cardiorenal
• Pesquisador responsável: Carlos Renato Tirapelli
• Beneficiário: Juliana Teixeira da Rocha
• Instituição Sede: Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto (EERP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/60076-7 - Efeito do consumo crônico de etanol sobre o sistema adrenomedulina em aorta e leito mesentérico de ratos e avaliação do papel protetor desse peptídeo nas alterações vasculares induzidas pelo etanol, AP.JP
• Assunto(s): Etanol Adrenomedulina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adrenomedulina | Etanol | Leito Mesentérico | Farmacologia

Resumo

PLANO DE TRABALHOa) MetodologiaEstudo funcional da reatividade em leito mesentérico isolado: A reatividade do leito mesentérico será estudada utilizando-se perfusão constante de 4ml /min. O leito mesentérico será transferido para uma cuba de órgão aquecida a 37°C. A artéria mesentérica superior canulada será acoplada a uma bomba de perfusão Um transdutor de pressão será acoplado em um arranjo em "y" ao sistema para a medida da pressão de perfusão. As variações na pressão de perfusão serão registradas com o auxílio do sistema de aquisição de dados DATAQ DI-150 (Akron, OH, EUA). Serão realizadas curvas concentração-resposta para a AM, acetilcolina e nitroprussiato de sódio. A reatividade à AM também será avaliana na presença de antagonistas dos seus receptores e inibidores da NO sintase e de prostanóides vasodilatadores.Reação em cadeia da polimerase em tempo real (RQ-PCR): O RNA será extraído com TRIZOL. A construção do DNA complementar (cDNA) será realizada por transcrição reversa através da enzima Superscript .O cDNA obtido será então submetido à amplificação por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) quantitativo em tempo real (q-PCR). Será utilizado o sistema disponível comercialmente TaqMan Assay-on-demand, composto por oligonucleotídeos e sondas (Applied Biosystems) para a análise quantitativa da expressão dos genes selecionados: pré-pró-adrenomedulina, receptor para adrenomedulina CRLR (receptor semelhante ao receptor da calcitonina), RAMP 1, 2 e 3 ( proteína que modifica a atividade do receptor), eNOS. Todas as reações de tempo real serão realizadas no aparelho 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems).