Caracterização molecular e testes de sensibilidade de Candida tropicalis isoladas em corrente sanguínea e cateter de pacientes internados em hospitais de ensino.

• Processo: 10/07055-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2010
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Maria Aparecida Shikanai Yasuda
• Beneficiário: Sheila Cristina Vicente da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/61438-0 - Caracterizacao molecular e testes de sensibilidade de candida tropicalis isoladas em corrente sanguinea e cateter de pacientes internados em hospitais de ensino., AP.R
• Assunto(s): Candida tropicalis Fungemia Tipagem molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: antifugigrama | Candida tropicalis | correlação clínico-laboratorial | fungemia | tipagem molecular | Doenças Infecciosas e Parasitárias

Resumo

As candidemias são importantes causas de morbi-mortalidade, constituindo-se na quarta causa de infecção de corrente sanguínea, sendo responsáveis pelo aumento do tempo e dos custos de hospitalização. Em estudo retrospectivo tipo série de casos sobre pacientes com fungemia por C. tropicalis, internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP de março de 1996 a março de 2003, observou-se um aumento de casos nos anos de 1998 a 2001 em várias enfermarias desse Hospital, sem que se pudesse caracterizar um surto hospitalar por C. tropicalis. Esse estudo tem como objetivo a tipagem molecular de 61 isolados de C. tropicalis a partir de candidemias no Hospital das Clínicas da FMUSP neste período e em outro hospital terciário no interior do Estado de São Paulo, através das técnicas de RAPD, utilização do RAPD em DNA de seqüências conservadas ou não previamente amplificadas, eletroforese em campo pulsátil (com enzimas de restrição) e MLST ("Multilocus Sequence Typing"). Até o presente foram realizadas as reações de RAPD sendo selecionados três iniciadores, tendo-se mostrado de fácil execução e reprodutível. Em amostras múltiplas de um mesmo paciente, 50% mostraram um padrão de diferença em duas ou + bandas. Os métodos de NCCLS e EUCAST apresentaram resultados da sensibilidade de C. tropicalis aos antifúngicos, tendo sido observado o fenômeno de "trailing" em 30 a 70% das amostras frente aos azóis. A eletroforese em campo pulsátil (utilizando-se as enzimas de restrição SfiI, BssHII e NaeI) mostrou potencial para discriminação para a enzima SfiI. Para a análise de MLST o DNA dos isolados de C tropicalis foram submetidos à reação de amplificação através de fragmentos polimórficos de seis genes: MDR1, ICL1, SAPT2, SAPT4, XYR1 e ZWF1a. Proceder-se-á ao emprego de seqüenciamento dos fragmentos, análise do poder discriminatório, reprodutibilidade, exeqüibilidade das técnicas de tipagem molecular, bem como ao estudo do antifungigrama em meio com pH ácido, e ao estudo da correlação entre dados clínicos e laboratoriais.