Avaliação de biofilmes multiespécie formados em diferentes substratos e expostos a concentrações salivares de agentes antimicrobianos: quantificação de microrganismos e morfologia tridimensional do biofilme

• Processo: 10/15625-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Clínica Odontológica
• Pesquisador responsável: Altair Antoninha Del Bel Cury
• Beneficiário: Anne Caroline Alves Ramos
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/07894-9 - Avaliação de biofilmes multiespécie formados em diferentes substratos e expostos a concentrações salivares de agentes antimicrobianos: quantificação de microrganismos e morfologia tridimensional do biofilme, AP.R
• Assunto(s): Titânio Resinas acrílicas Antibióticos Antifúngicos Prótese dentária Hidroxiapatita
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: antibiotico | Antifúngico | Biofilme oral | hidroxiapatita | Resina acrílica | titânio | Prótese Dental

Resumo

A formação e acúmulo de biofilme em substratos presentes na cavidade oral é o principal fator etiológico das doenças bucais. Estudos avaliando biofilme multiespécie são escassos e muito pouco se conhece da organização tridimensional das espécies presentes no biofilme e das alterações que poderiam ocorrer no mesmo na presença de antimicrobianos excretados na saliva. O objetivo deste estudo será avaliar biofilme multiespécie formado em substratos presentes na cavidade oral quando expostos a concentrações salivares de diferentes agentes antimicrobianos. Serão utilizados espécimes de três substratos: hidroxiapatita, titânio e resina acrílica. Após a mensuração da rugosidade de superfície e esterilização por óxido de etileno, os espécimes serão acondicionados em placa de 24 poços para a formação da película adquirida. Em seguida será acrescentado meio fluido universal (FUM) contendo inóculo dos 6 microrganismos a serem estudados: Actinomyces naeslundii, Veillonella dispar, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus sobrinus, Streptococcus oralis e Candida albicans. As placas serão incubadas em anaerobiose a 37º C até completar a formação de um biofilme de 72 h. Em seguida os espécimes serão imersos em meio FUM contendo um dos agentes antimicrobianos (azitromicina, metronidazol e fluconazol) por 24 h. Para mensuração das células viáveis, o biofilme será removido dos substratos através de sonicação (7 watts, 30 segundos) em solução tampão fosfato (PBS). Essa solução será diluída serialmente em PBS e plaqueada nos meios de cultura Columbia Blood ágar sangue, Mitis Salivarius ágar, Fastidious Anaerobe ágar e Sabouraud ágar. Após incubação, as contagens das unidades formadoras de colônia (UFC) serão realizadas com o auxílio de um microscópio estereoscópico e expressas em UFC/mm2. A visualização das espécies em cores distintas dentro do biofilme será realizada através da Hibridização in situ por Fluorescência (FISH) e observação em microscopia confocal a laser. As contagens de UFC e a microscopia confocal serão realizadas no biofilme formado (baseline) e após a imersão em agente antimicrobiano.