Caracterização Morfológica e Molecular de Microsporídios infectantes de larvas de Simulium spp.

• Processo: 10/20046-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Entomologia e Malacologia de Parasitos e Vetores
• Pesquisador responsável: Carlos José Pereira da Cunha de Araújo Coutinho
• Beneficiário: Rosiane Brito de Moraes
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Controle biológico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Controle Biológico | Microsporideos | Simulídeos | Patologia de Insetos

Resumo

Simulídeos são dípteros da família Simuliidae popularmente conhecidos como piuns ou borrachudos com ampla distribuição geográfica. Através da sua picada, podem causar prurido intenso e irritação cutânea, e culminar em reações imunológicas, bem como, por apresentar espécies transmissoras de doenças, o controle deste grupo é um grande desafio para a Saúde Pública.O objetivo deste estudo é de analisar larvas infectadas por microsporídios e fazer identificação de espécies desse agente entomopatógênico por meio da caracterização morfológica dos esporos e pela utilização de técnicas moleculares. As larvas serão coletadas no município de Caraquatatuba SP, quinzenalmente, retiradas de substratos naturais e mantidas sob aeração contendo água do próprio criadouro possibilitando a sobrevivência das mesmas até á chegada ao laboratório aonde serão mantidas em criadouro artificial. Serão feitas análises cuidadosas das larvas que apresentarem sintomatologia de infecção por microsporídio, e a identificação de tecidos infectados será melhor determinada através de microscopia de partes do tecido fixado.Para a fixação do material as mesmas serão dissecadas em água destilada e desse material serão feitos esfregaços a fresco e corados pelo método de Giensa a 10% (Undeen e Vavra (1997)). Para a caracterização molecular dos microsporídios isolados serão feitas análises do DNA ribossomal 16S através de preparação de esporos obtida a partir de macerado de larvas infectadas, os esporos purificados serão mecanicamente rompidos para a liberação do DNA, sendo o material obtido, imediatamente aquecido à 95ºC por 5 minutos para inativar DNAses e depois centrifugado. O sobrenadante resultante contendo o DNA servirá de molde para a amplificação.