Influência do meio de cultivo de embriões (BARC), suplementado com diferentes macromoléculas, sobre a maturação de oócitos bovinos in vitro

• Processo: 11/11985-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Alicio Martins Júnior
• Beneficiário: Jéssica de Oliveira Caldeira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Processo(s) vinculado(s): 12/20723-4
• Assunto(s): Maturação in vitro Meios de cultura Fertilização in vitro Bovinos Embrião Oócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | embrião | maturação in vitro | Meio de Cultura | meio de maturação | oócitos | Fertilização in vitro

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo verificar a influência do meio de cultivo (BARC) de embriões bovinos, suplementado com BSA, SFB e PVA, separadamente, sobre a maturação de oócitos in vitro, evidenciados pela produção e qualidade dos embriões ao estágio de blastocisto expandido. Quatro experimentos serão efetuados, de acordo com o seguinte delineamento experimental: exp.1: SFB será adicionado ao meio BARC nas concentrações de 0, 5 e 10%; exp. 2: BSA será adicionada ao meio BARC nas concentrações de 0, 4 e 8 mg/mL; exp. 3: PVA, será adicionado ao meio BARC nas concentrações de 0, 0,5 e 1 mg/mL; exp. 4: comparação entre meios de maturação suplementados com BSA, SFB ou PVA, avaliando-se o desenvolvimento embrionário até o estágio mencionado, o número total de células (NTC) e apoptose. Os oócitos serão obtidos a partir de ovários de vacas sacrificadas em frigorífico; oócitos selecionados (PBS + SFB, BSA ou PVA) serão maturados (grupos de 20 oócitos/gota/100 mL) em meio BARC, acrescido de gonadotrofinas e penicilina, conforme delineamento experimental. A seleção espermática será realizada em gradiente de Percoll, utilizando o meio TALP para FIV. A cultura in vitro dos embriões será em meio SOF-m; todas as etapas serão efetuadas em incubadora de CO2 a 5%, a 38,7ºC, atmosfera úmida, em ar. O número de oócitos que clivarem e atingirem os estágios de mórula, blastocisto e blastocisto expandido será registrado, respectivamente, às 72, 144 e 168 horas pós-inseminação. ANOVA e teste t de Bonferroni serão empregados para análise de diferenças entre os grupos (desenvolvimento embrionário). A ocorrência de apoptose e o NTC serão verificados através do teste de Mann-Whitney e "one- way repeated measures " ANOVA, respectivamente. Diferenças de p<0,05 serão tomadas como significativas.