Identificação e caracterização de novos componentes do complexo telomérico de tripanosomatídeos utilizando estudos in vitro e in vivo.

• Processo: 11/19682-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2012
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Vinícius Santana Nunes
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Leishmania Telômero Trypanosomatidae
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Complexo CST | Klueveromyces lactis | leishmania | Rpa-1 | telômeros | tripanossomatídeos | Biologia molecular e bioquimica de tripanosomatideos

Resumo

Telômeros são complexos DNA/proteína que protegem as pontas dos cromossomos. A manutenção dos telômeros e a atividade da telomerase dependem de complexos protéicos que se associam com o DNA telomérico. Por exemplo, o complexo CST interage com a telomerase e com a maquinaria de replicação do DNA, controlando a replicação nos terminais de cromossomos. Telômeros de tripanossomatídeos são compostos por repetições (TTAGGG)n, porém poucas proteínas teloméricas destes organismos foram identificadas. O complexo telomérico melhor caracterizado é o de L. amazonensis, que consiste basicamente das proteínas telomerase, LaRBP38 e LaRPA-1 que interagem com a simples fita rica em G e podem ser homólogas funcionais da CDC13 de levedura e da POT1 de vertebrados. A RPA é um complexo protéico ligante de DNA na forma de simples-fita que desempenha papel importante no metabolismo de DNA, incluindo manutenção de telômeros e reparo de DNA. A hipótese que iremos testar, e que norteia este pedido, baseia-se no fato da LaRPA-1 estar envolvida na proteção e manutenção de telômeros em L. amazonensis e talvez em outros tripanosomatídeos. Além disso, a biologia de telômeros nestes parasitos pode envolver proteínas teloméricas ainda não identificadas. Através de análises in silico, propomos identificar as proteínas homólogas as TEN1 e STN1 que compõem o complexo CST em outros organismos, e caracterizá-las em fusão à GFP. Ainda, integrar a repetição (TTAGGG)n no telômero da K. lactis e, caracterizar o efeito desta integração na manutenção e proteção deste, na presença e ausência da RPA-1 de tripanosomatídeos. Finalmente, identificar e caracterizar proteínas que interagem com LaRPA-1/TcRPA-1. O eficiente sistema de expressão heteróloga, que vai permitir os estudos sobre telômeros dos protozoários in vivo e ensaios bioquímicos, in vitro, serão ferramentas valiosas na compreensão da conservação da biologia de telômeros em tripanossomatídeos.