Avaliação do perfil de expressão gênica das células tronco hematopoéticas isoladas do saco vitelino de embriões bovino

• Processo: 12/09874-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 15 de agosto de 2012
• Data de Término da vigência: 14 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Carlos Eduardo Ambrósio
• Beneficiário: Vanessa Cristina Oliveira Nogueira de Pontes
• Supervisor: Jorge A. Piedrahita
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: North Carolina State University (NC State), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 11/04916-4 - Caracterização da célula tronco hematopoética do saco vitelino em embriões bovino, BP.MS
• Assunto(s): Saco vitelino Genes Células-tronco Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | celula tronco | genes | Célula tronco

Resumo

O saco vitelino é uma membrana extra-embrionária que desempenha um papel importante para sobrevivência inicial do embrião durante a fase inicial de gestação. Sua função é complexa participando da hematopoese, pois através desta se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas e parte do sistema circulatório primitivo. Faz a transferência de materiais materno fetais tais como aminoácidos, vitaminas e proteínas, também é uma provável fonte de célula tronco no qual abriga as primeiras células do sangue, os eritrócitos os quais expressam fatores de transcrição que especificam estas células ao seu destino hematopoético. Para caracterizarmos uma célula tronco precisamos da presença de certos marcadores na superfície celular como também a ausência desses marcadores. Os principais genes expressos em células tronco hematopoéticas são: SCL, TAL-1, LMO2, GATA-3, RUNX-1 e CD45. Esta pesquisa tem como objetivo realizar a análise da expressão gênica das células hematopoéticas dos embriões em diferentes estágios gestacionais, a fim de caracterizar molecularmente as culturas a partir de amostras do saco vitelino de embriões bovinos. Estas amostras são provenientes de úteros gravídicos de embriões bovinos coletados no frigorifico Barra Mansa localizado na cidade de Ribeirão Preto. O saco vitelino será retirado, separado das membranas fetais e dissecado, após será cultivado em meio especifico para célula tronco hematopoética (StemPro®-34 SFM) essas células serão mantidas em cultura por 5 dias e após este período serão centrifugadas, seus pellets serão colocados em Trizol e acondicionados em freezer -80°C. Após o RNA total será extraído utilizando-se o kit TRIzol (Invitrogen), tratado com DNase I (Invitrogen)e este convertido em cDNA. A amplificação do cDNA será realizada utilizando-se os seguintes pares de primers para os transcritos GATA-3, LMO, RUNX-1, ANXA-5 e GAPDH. Todos os cDNAs de genes específicos amplificados para uma determinada amostra sempre serão executados por PCR. Previamente ao início das análises, as condições de amplificação serão testadas para se definir o melhor padrão de reação. Os valores de expressão gênica serão sempre expressos em relação à expressão do gene endógeno GAPDH. (AU)