Expressão e purificação de uma forma atóxica recombinante da toxina de Shiga (Stx2) de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC)

• Processo: 13/00440-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Luis Carlos de Souza Ferreira
• Beneficiário: Mônica Josiane Rodrigues de Jesus
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Desenvolvimento de vacinas Proteínas recombinantes Escherichia coli Toxicidade Cromatografia In vivo Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ehec | Proteinas recombinantes | Toxina de Shiga (Stx2) | Desenvolvimento de Vacinas

Resumo

A toxina Stx produzida por linhagens de E. coli enterohemorrágica (EHEC), em especial por linhagens do sorotipo O157:H7, é responsável pela principal sequela associada à infecção, a Síndrome Hemolítica Urêmica (SHU), com altos índices de mortalidade e morbidade. Não existem terapias ou tratamentos preventivos contra a SHU, mas diversas estratégias vacinais estão sendo pesquisadas para o controle da doença. No presente projeto, propomos lançar as bases para o desenvolvimento de uma vacina contra a SHU baseada em uma forma recombinante atóxica do variante 2 da Stx (Stx2m). O trabalho de iniciação científica consistirá no estabelecimento de um protocolo otimizado para a expressão e a purificação da Stx2m a partir de linhagens de E.coli BL21. A Stx2m será purificada por cromatografia de afinidade em resina contendo níquel e posteriormente tratada para a remoção da endotoxina residual. Espera-se, portanto, que ao final do projeto, seja possível dispor-se da Stx2m em condições para ser utilizada em ensaios de imunização e toxicidade in vitro e in vivo, o que contribuirá para os estudos de novas aplicações vacinais direcionadas ao controle da SHU.(AU)