Identificação e caracterização funcional de RNAs não-codificadores de proteínas longos regulados por micro-RNAs

• Processo: 13/14550-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Sergio Verjovski Almeida
• Beneficiário: Murilo Sena Amaral
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Epigênese genética Dano ao DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dano ao DNA | epigenética | Micro-RNAs | RNAs longos não-codificadores de proteínas | Bioquímica e Biologia Molecular de Eucariotos

Resumo

Trabalhos nos últimos anos têm revelado que a maior parte das mensagens transcritas em células humanas é composta por RNAs não codificadores de proteínas (ncRNAs). Uma grande parte destes ncRNAs é composta por RNAs curtos (<200 nucleotídeos). Entre estes,os micro-RNAs (miRNAs) têm sido alvo de grande interesse, em função da possibilidade destes RNAs regularem mais de 60% dos mRNAs humanos. Outra subclasse dos ncRNAs, denominada ncRNAs longos (lncRNAs, >200 nucleotídeos), mapeia em regiões intergênicas e principalmente intrônicas do genoma humano e possuem uma função regulatória na expressão gênica em situações normais e patológicas. Recentemente, os lncRNAs têm sido caracterizados quanto à sua estrutura e função. No entanto, muito pouco se sabe sobre os mecanismos pelos quais os lncRNAs são regulados. Neste projeto, pretende-se testar a hipótese de que lncRNAs sejam regulados negativamente por miRNAs de uma maneira direta e disseminada ao longo do transcriptoma humano e que argonauta2 (Ago2), componente do complexo de silenciamento induzido por miRNAs, seja uma das proteínas efetoras envolvidas na diminuição dos níveis dos lncRNAs. Os experimentos propostos visam inicialmente expandir, por meio de sequenciamento em larga escala de RNAs longos unidos a Ago2, o conjunto de lncRNAs possíveis alvos de miRNAs já identificados em um sequenciamento piloto que fizemos. Em seguida, pretende-se validar a interação entre miRNAs e lncRNAs que serão selecionados, e confirmar a regulação direta de lncRNAs por miRNAs. Finalmente, será testado o papel funcional da possível regulação miRNA-lncRNA em modelo celular por meio de ensaios de proliferação celular, ciclo celular e apoptose. O conjunto de experimentos propostos pretende esclarecer o papel de miRNAs no silenciamento de lncRNAs e a relevância funcional deste mecanismo de regulação e, de uma maneira mais ampla, contribuir para o entendimento do metabolismo e da regulação dos níveis de lncRNAs em células humanas. (AU)