Estudo da proteína osteopontina no plasma seminal de cães

• Processo: 13/25831-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fabiana Ferreira de Souza
• Beneficiário: Leticia de Andrade Ramos
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Fertilidade Próstata Aminoácidos Osteopontina Proteômica Sêmen Cães Espectrometria de massas Western blotting
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: fertilidade | plasma-seminal | Próstata | proteômica | Fisiologia espermática

Resumo

Em vista da preocupação com o controle de populações de cães errantes, a busca por um antígeno para produção de uma vacina contraceptiva tem sido constante. Desta forma, o objetivo deste estudo será identificar a osteopontina, uma proteína associada à fertilidade em diferentes espécies, no plasma seminal de cães pela técnica de western-blot e com base nesta informação submeter a amostra marcada para espectrometria de massa, a fim de sequenciar os resíduos de aminoácidos. Para isto, será utilizado o plasma seminal de 5 cães, com fertilidade comprovada pelo histórico de cobertura recente. O sêmen será colhido por manipulação digital do pênis, a qualidade espermática será avaliada e o plasma seminal será separado por duas centrifugações (800xg, 10 minutos na temperatura ambiente e 10.000xg, 30 minutos, a 4ºC). A concentração de proteína total será mensurada pelo método de Bradford e as amostras serão submetidas à eletroforese unidimensional e western-blot utilizando anticorpo anti-OPN. As bandas marcadas no western-blot serão recortadas e o sequenciamento dos aminoácidos será realizado pela espectrometria de massa, numa parceria com a Università degli Studi di Bari, Itália. Espera-se identificar a homologia entre a osteopontina bovina e a proteína marcada pelo anti-OPN nas amostras de plasma seminal do cão.