Validação de protocolo para extração de RNA total de Brevipalpus phoenicis e prospecção de genes para RNA interferente (RNAi)

• Processo: 14/12514-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Valdenice Moreira Novelli
• Beneficiário: Marcelo Campos dos Santos
• Instituição Sede: Instituto Agronômico (IAC). Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios (APTA). Secretaria de Agricultura e Abastecimento (São Paulo - Estado). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Acarologia Expressão gênica Citricultura RNA Métodos de extração
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ácaro da Leprose | Citricultura | Acarologia

Resumo

A citricultura, atividade de grande importância econômica para o Brasil, é acometida por diversas doenças e pragas, com destaque para a leprose dos citros, causada pelo Citrus leprosis virus C (CiLV-C), e transmitida pelo ácaro Brevipalpus phoenicis (Acari: Tenuipalpidae). Este ácaro é polífago, cosmopolita, e com relevância na agricultura devido à sua alta capacidade vetora, sendo responsável pela transmissão de inúmeros outros fitovírus em diversas culturas. Na cultura dos citros, os acaricidas são agrotóxicos de alto custo para os produtores sendo utilizados extensivamente na tentativa de controle desse ácaro vetor. Compreender os mecanismos relacionados à interação entre plantas, B. phoenicis e patógenos são extremamente desejáveis e, sob vários aspectos, ainda necessitam ser esclarecidos. Uma das estratégias viáveis é conhecer a gênomica funcional (transcriptoma) do ácaro, ampliando as informações sobre a capacidade vetora e gerando informações potenciais para novos métodos de manejo e controle. Embora já tenham sido descritos diversos protocolos para extração de RNA de ácaros, especificamente para tenuipalpídeos isso ainda não foi estabelecido. A experiência prévia de nosso grupo, visando a extração de DNA para outros estudos genômicos, demostrou ser uma tarefa difícil e trabalhosa a obtenção de um protocolo padrão com qualidade e concentração de material adequados ao sequenciamento. Considerando que moléculas de RNA são muito mais instáveis, faz-se necessário padronizar e otimizar o processo de obtenção de RNA de boa qualidade antes de iniciar os estudos de transcriptoma desta espécie. Portanto, esta proposta objetiva testar diferentes protocolos de extração de RNA total de B. phoenicis, com o intuito de obter qualidade e quantidade de material desejáveis para estes estudos de expressão gênica. Uma vez padronizado esse método de extração, serão explorados genes candidatos, para aplicação da tecnologia de RNA interferente, utilizando como referência o banco de dados genômicos de Tetranychus urticae, considerado o ácaro padrão para estudos genômicos de B. phoenicis. (AU)