| Processo: | 14/15448-0 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Data de Início da vigência: | 01 de outubro de 2014 |
| Data de Término da vigência: | 30 de setembro de 2016 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada |
| Acordo de Cooperação: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) |
| Pesquisador responsável: | Luiziana Ferreira da Silva |
| Beneficiário: | Edmar Ramos de Oliveira Filho |
| Instituição Sede: | Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Engenharia metabólica Pseudomonas Biopolímeros Poli-hidroxialcanoatos Copolímeros |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Biopolímeros | Copolímeros híbridos | mini-Tn7 | Polihidroxialcanoatos | Pseudomonas | recombinantes | Engenharia Metabólica |
Resumo Polihidroxialcanoatos (PHA) são biopolímeros produzidos e acumulados naturalmente por diversas linhagens bacterianas. Esses biopolímeros exibem grande potencial para substituir os plásticos derivados de petróleo, por serem termoplásticos, biodegradáveis, biocompatíveis e produzidos a partir de fontes renováveis. Devido suas características físicas e mecânicas, que variam de acordo com a composição de sua cadeia monomérica, apresentam aplicações diversas. Os PHAs podem ser formados por monômeros de cadeia curta (PHASCL) ou média (PHAMCL), podendo formar copolímeros híbridos (HASCL-HAMCL) com propriedades intermediárias, interessantes para a indústria de materiais. A PHA sintase é a enzima chave na biossíntese de PHA, por ser responsável pela catálise da polimerização das moléculas de (R)-hidroxiacil-CoA que compõem o biopolímero. Em trabalho realizado em nosso grupo, foi demonstrada a produção de copolímeros HASCL-HAMCL em linhagens de pseudomonas abrigando genes de PHA sintase de Ralstonia eutropha em vetores plasmidiais. Neste trabalho, a proposta é a construção de quatro linhagens estáveis de pseudomonas, abrigando genes de PHA sintase de Ralstonia eutropha ou de Aeromonas hydrophila em seu genoma. A inserção do gene no genoma excluiria inconvenientes inerentes à presença de um plasmídio na célula bacteriana, como o estado multicópia do gene e a necessidade de seleção contínua usando antibióticos. Para isso, será usado o sistema mini-Tn7, o qual é eficiente e de fácil manipulação. Os elementos mini-Tn7 podem ser prontamente transferidos para formação de mutantes. Em biologia molecular é amplamente conhecido e promove uma única inserção no genoma da bactéria. As linhagens obtidas serão testadas fenótipo e genotipicamente para confirmar a presença do gene de interesse em seu DNA genômico e a ausência de marca de resistência, decorrente das manipulações genéticas. Para avaliar a capacidade das linhagens recombinantes obtidas quanto ao acúmulo de PHA, serão realizados experimentos em agitador rotativo e em biorreator. A composição dos PHAs produzidos será avaliada e comparada com os resultados obtidos previamente, além disso, será realizada análise de fluxos metabólicos no contexto da biossíntese de PHA. (AU) | |
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