Identificação dos processos celulares que estão alterados no knockout de Ric-8B utilizando sequenciamento em larga escala de transcriptomas

• Processo: 14/15495-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Bettina Malnic
• Beneficiário: Maíra Harume Nagai
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 17/00726-2 - Estudo da função de Ric-8B na ativação de mTOR usando um modelo olfatório, BE.EP.PD
• Assunto(s): Embriogênese Sistema nervoso
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: camundongo knockout | Desenvolvimento embrionário | Gef | Proteína G | Ric-8B | sistema nervoso | Biologia Molecular

Resumo

Através do olfato, os animais são capazes de identificar a composição química do meio ambiente. A detecção de odorantes é mediada por milhões de neurônios olfatórios localizados na cavidade nasal. Cada neurônio possui um dendrito que termina em um botão dendrítico de onde partem vários cílios; nessas estruturas estão localizados os receptores olfatórios. A ligação de odorantes aos receptores olfatórios leva à ativação de uma proteína G heterotrimérica específica, a Golf. Quando isso ocorre, a subunidade ± de Golf troca GDP por GTP e se dissocia do complexo com G²³ para ativar a adenilil ciclase III. Os níveis de cAMP intracelular então se elevam e promovem a abertura dos canais ativados por nucleotídeos cíclicos, causando o influxo de Na+ e Ca2+ que culmina na geração do potencial de ação neuronal. Em nosso laboratório, foi identificada a interação de G±olf com a proteína RIC-8B, que atuaria como um possível regulador da sinalização olfatória. Em camundongo adulto, Ric-8B é coexpressa com G±olf de maneira específica e restrita aos neurônios olfatórios e ao striatum, no cérebro. Além disso, RIC-8B é capaz de amplificar a sinalização olfatória em sistemas heterólogos. Estudos in vitro fornecem evidências de que RIC-8B é um fator trocador de nucleotídeos de guanina que interage com G±s e G±q. Portanto, para caracterizar a função in vivo de Ric-8B, estabelecemos uma linhagem de camundongo knockout para o gene Ric-8B. Verificamos que o knockout de Ric-8B é inviável, o que indica que esta proteína é essencial durante o desenvolvimento embrionário. A expressão de Ric-8B no embrião é restrita ao sistema nervoso e o knockout apresenta malformações do tubo neural cranial, apontando para uma função de Ric-8B diferente daquela desempenhada no olfato. Dessa forma, esse projeto tem como objetivo compreender qual o papel desempenhado por Ric-8B durante a embriogênese. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MACHADO, CLEITON F.; NAGAI, MARIA H.; LYRA, CASSANDRA S.; REIS-SILVA, THIAGO M.; MACHADO, ANDRE M.; GLEZER, ISAIAS; FELICIO, LUCIANO F.; MALNIC, BETTINA. Conditional Deletion of Ric-8b in Olfactory Sensory Neurons Leads to Olfactory Impairment. JOURNAL OF NEUROSCIENCE, v. 37, n. 50, p. 12202-12213, DEC 13 2017. (16/24471-0, 14/15495-8, 12/24640-6)

NAGAI, MAIRA H.; XAVIER, VICTOR P. S.; GUTIYAMA, LUCIANA M.; MACHADO, CLEITON F.; REIS, ALICE H.; DONNARD, ELISA R.; GALANTE, PEDRO A. F.; ABREU, JOSE G.; FESTUCCIA, WILLIAM T.; MALNIC, BETTINA. Depletion of Ric-8B leads to reduced mTORC2 activity. PLOS GENETICS, v. 16, n. 5, MAY 2020. (14/15495-8, 19/05166-0, 16/24471-0)